[發(fā)明專利]一種銀杏酮酯片中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的整合溶出度的檢測及驗證方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910089568.8
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109738544B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 江美芳;高崎;王丹丹;朱國琴
• 申請（專利權(quán)）人: 上海上藥杏靈科技藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/36;G01N30/72
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種銀杏酮酯片中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的整合溶出度的檢測方法，包括以下步驟：采用如下方法測定銀杏酮酯片中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的溶出度；具體步驟如下：

1)供試品溶液的制備：取銀杏酮酯片，加入甲醇水溶液進行超聲提取、離心后取上清液，加入甲醇水溶液定容后再稀釋，即得供試品溶液；

步驟1)中，所述銀杏酮酯片加入的質(zhì)量mg與甲醇水溶液加入的體積mL之比為80-120：4-6；

2)對照品溶液的制備：將銀杏酮酯片中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的對照品分別加入二甲基亞砜溶解后配成相應(yīng)的對照品母液，再分別取對照品母液混合后加入甲醇水溶液定容，得到對照品溶液；

3)溶出溶液的制備：取溶出介質(zhì)，加入銀杏酮酯片進行溶出實驗后，取樣離心后取上清液，再加入溶出介質(zhì)稀釋，即得溶出溶液；

步驟3)中，所述銀杏酮酯片加入的質(zhì)量mg與溶出介質(zhì)加入的體積mL之比為1440-1560:450-550；

4)檢測：采用UPLC-Q-TOF-MS分別測定供試品溶液、對照品溶液及溶出溶液，根據(jù)分子質(zhì)量、保留時間，分別確定供試品溶液和溶出溶液中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分，并根據(jù)外標法分別確定供試品溶液和溶出溶液中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的含量；

步驟4)中，色譜條件，包括以下條件：

A1)色譜柱為C₁₈色譜柱；

A2)柱溫為40-50℃；

A3)流速為0.3-0.5ml/min；

A4)進樣量為1-5μL；

A5)流動相為甲酸水-甲醇溶液，其中，A相為甲酸水，B相為甲醇；

A6)洗脫方式為梯度洗脫，分析時間為15min；

所述梯度洗脫程序具體為：

0-10min，A相：B相體積比為98：2-25：75；

10-10.5min，A相：B相體積比為25：75-2：98；

10.5-13min，A相：B相體積比為2：98-2：98；

13-13.5min，A相：B相體積比為2：98-98：2；

13.5-15min，A相：B相體積比為98：2-98：2；

步驟4)中，質(zhì)譜條件為：掃描模式為負離子條件下Sensitivity模式；掃描時間為14-16min；離子源為ESI源；離子源溫度為110-130℃；毛細管電壓為2-3kV；脫溶劑氣流速為700-900L/h；脫溶劑氣溫度為300-500℃；錐孔電壓為30-40V；萃取電壓為3-5V；數(shù)據(jù)采集模式為MS^E；掃描范圍為m/z 40-1500amu；

5)溶出度計算：將供試品溶液與溶出溶液中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的含量，按公式Ⅰ分別計算銀杏酮酯片中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的溶出度，所述公式Ⅰ為：溶出度％＝(Ai×V1×m2)/(Bi×V2×m1)×100％；其中，Ai：溶出溶液中各成分的含量，ng/mL；Bi：供試品溶液中各成分的含量，ng/mL；V1：溶出介質(zhì)體積，mL；V2：供試品溶液體積，mL；m1：溶出溶液中加入銀杏酮酯片重量，g；m2：供試品溶液制備時銀杏酮酯片重量，g；

所述銀杏酮酯片中萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分包括有銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯、蘆丁、異槲皮苷、3-O-GLC-異鼠李素、山奈酚-3-O-蕓香糖、香蒲新苷；

其特征在于，

A)取銀杏酮酯片，根據(jù)溶出度的檢測方法中步驟3)，于不同溶出時間點進行溶出試驗，獲得一系列的溶出溶液；

B)將步驟A)獲得的一系列的溶出溶液，根據(jù)溶出度的檢測方法中步驟4)進行測定，獲得一系列的溶出溶液中各個萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的含量；

C)將步驟B)獲得的一系列的溶出溶液中各個萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的含量，根據(jù)溶出度的檢測方法中步驟5)進行計算，獲得一系列的溶出溶液中各個萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的溶出度；

D)根據(jù)溶出度的檢測方法中步驟4)獲得的供試品溶液中各個萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的含量，按公式Ⅱ計算各個萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的質(zhì)量權(quán)重系數(shù)，所述公式Ⅱ為：ψ＝n/ω，其中，ψ為質(zhì)量權(quán)重系數(shù)；ω為成分的總含量，％；n為各成分中任意一個成分的含量，％；

E)將步驟D)獲得的供試品溶液中各個萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的質(zhì)量權(quán)重系數(shù)，與步驟C)獲得的一系列的溶出溶液中相應(yīng)萜內(nèi)酯類和黃酮苷類成分的溶出度，按公式Ⅲ計算各成分于不同溶出時間點的整合溶出度，所述公式Ⅲ為：

其中，δ為整合溶出度，％；A，B，C…為各成分溶出度，％；ω為成分的總含量，％；i為成分個數(shù)，n為各成分的個數(shù)集合；abc…為各成分的含量，％。