[發明專利]一種水產品中己烯雌酚殘留量的檢測方法

在審

• 申請號: 201910086900.5
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN109738542A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 王偉華;付杰;高晨;郭駿
• 申請（專利權）人: 江蘇康達檢測技術股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京集智東方知識產權代理有限公司 11578
• 代理人: 張紅;林青

本發明涉及一種水產品中己烯雌酚殘留量的檢測方法，所述方法包括如下步驟：(1)制備標準試劑；(2)提取待衍生樣液：將5.00g勻漿樣品置于50mL離心管，加入0.5g無水硫酸鎂、8mL乙酸乙酯渦旋混合2min后，于5000r/min離心5min，得到第一待衍生樣液；取2mL脫水后的第一待衍生樣液于2mL離心管，加入0.2g中性氧化鋁，離心后準確移取1mL上清液待衍生，得到第二待衍生樣液；(3)試樣的衍生化；(4)標準工作溶液的衍生化；(5)計算濃度。本發明的檢測方法減少了溶劑的使用量，從而便于批量化檢測，且衍生化的結果更佳。

技術領域

本發明涉及激素檢測技術領域，特別涉及一種水產品中己烯雌酚殘留量的檢測方法。

背景技術

隨著水產品食品越來越得到大眾的喜愛，其安全性檢測非常重要。己烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)是一種人工合成的非甾體雌激素，因其具有增加蛋自質沉積和減少脂肪沉積的作用而作為促生長劑廣泛應用于養殖業，后經研究發現DES殘留對生物體具有刺激性早熟及潛在的致畸致癌等危害，因此動物性食品中己烯雌酚的殘留檢測問題受到國內外的高度重視。從市場的調查結果可知，盡管大部分國家已經規定在飼料中禁止添加DES，然而受到強大經濟利益的驅使，濫用DES現象仍然存在，同時在一些工業廢水和生活廢水中也存在著DES，在水產品食品中殘留的DES仍然威脅著食用者的健康，因此，必須建立方便有效的DES殘留檢測方法以確保動物性食品的安全。

現有的己烯雌酚殘留檢測方法主要有氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜聯機法(GC/MS)、液相色譜-質譜聯機法(LC/MS)、放射免疫法(RIA)和酶聯免疫吸附法(ELISA)。中華人民共和國國家標準《畜禽肉中己烯雌酚的測定》(GB/T 5009.108-2003)中采用高效液相色譜法方法，其敏度較高，重復性較好，定量精度較高，但容易受到雜質的干擾，需要用適宜的填料柱，容量小，流動相消耗大；農業部1163號公告-1-2009 《動物性食品中己烯雌酚殘留檢測酶聯免疫吸附測定法》中酶聯免疫吸附法檢測限及穩定性均達到要求，但DES試劑盒主要依靠國外進口，價格偏高；氣相色譜-質譜法雖能獲得較低的檢測限，但與氣相色譜法一樣，都必須要進行繁瑣的衍生化處理；液相色譜-質譜聯機法靈敏度高，檢測限低，但價格昂貴，難以在國內基層檢測部門普及；放射免疫法由于抗原抗體的特異性反應，存在交叉反應、假陽性反應的結果，組織樣品處理較繁瑣、需要有同位素防護設備，對操作人員有一定的危害等?？芍合┐品拥某Ｒ幓瘜W分析方法都存在一些不足，而對于目前的檢測需求來說，主要的問題在于，溶劑消耗量較大，難以進行批量化處理。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種水產品中己烯雌酚殘留量的檢測方法，具有溶劑消耗量少、便于批量化檢測的優點。

為達到上述目的，本發明的技術方案如下：

一種水產品中己烯雌酚殘留量的檢測方法，所述方法包括如下步驟：

(1)制備標準試劑

稱取10mg己烯雌酚，用甲醇定容與10mL容量瓶中，得到濃度為 100mg/L的標準試劑，置于18℃恒溫環境中保存；

(2)提取待衍生樣液

將5.00g勻漿樣品置于50mL離心管，加入0.5g無水硫酸鎂、8mL 乙酸乙酯渦旋混合2min后，于5000r/min離心5min，得到第一待衍生樣液；取2mL脫水后的第一待衍生樣液于2mL離心管，加入0.2g中性氧化鋁，離心后準確移取1mL上清液待衍生，得到第二待衍生樣液；

(3)試樣的衍生化

取1mL第二待衍生樣液，氮吹至近干，加入100μL衍生化試劑，密封；于100℃反應0.5h，取出冷卻至室溫，氮吹至近干，準確加入1mL正己烷，渦旋混合30s，供GC-MS檢測分析；

(4)標準工作溶液的衍生化