[發明專利]一種產5α-雄烷二酮的基因工程菌及其應用

有效

• 申請號: 201910086805.5
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN111484961B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: 王敏;申雁冰;趙云秋;駱健美;夏夢雷;馬賽
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/53;C12N15/74;C12N15/66;C12P33/02;C12R1/32
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.一株產5α-AD的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌是以主產AD的分枝桿菌為宿主細胞，異源表達5α-還原酶基因所得；

所述5α-還原酶基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

所述分枝桿菌為新金分枝桿菌MNR M3△ksdD。

2.權利要求1所述一株產5α-AD的基因工程菌的構建方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將所述5α-還原酶基因和表達質粒pMV261通過酶切，連接，構建pMV261-5α重組質粒；

（2）將所述重組質粒pMV261-5α導入至所述新金分枝桿菌MNR M3△ksdD感受態細胞中，構建的基因工程菌MNR M3△ksdD/261-5α。

3.權利要求1所述一株產5α-AD的基因工程菌用于發酵制備5α-AD的用途。

4.如權利要求3所述用途，其特征在于：所述基因工程菌發酵制備5α-AD具體如下：

將所述產5α-AD的基因工程菌經種子培養后，按5-10%的接種量接種至發酵培養基中，28-32℃，130-200r/min，pH6.5-7.8條件下，發酵4-8d；

所述發酵培養基組成如下：K₂HPO₄ 0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，檸檬酸鐵銨 0.05g/L，檸檬酸 2 g/L，磷酸氫二銨 3.5 g/L，葡萄糖10 g/L，植物甾醇1-30 g/L，余量為水，pH6.5-7.8。