[發(fā)明專利]人源化肝臟動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910085265.9
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號(hào): CN109735485B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 饒秀茸;黃益;易艷瓊;李泓彥
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市拓普生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;A01K67/027
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 潘霞

本發(fā)明涉及一種人源化肝臟動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。該人源化肝臟動(dòng)物模型的構(gòu)建方法包括以下步驟：將人源肝祖細(xì)胞注射入肝臟經(jīng)部分切除的免疫缺陷動(dòng)物中，得到人源化肝臟動(dòng)物模型。經(jīng)上述人源化肝臟動(dòng)物模型的構(gòu)建方法簡捷，避免在構(gòu)建過程中使用肝損傷藥物、病毒、細(xì)菌等而給建模后期的應(yīng)用帶來干擾的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種人源化肝臟動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝病是指發(fā)生在肝臟的病變，肝病種類繁多包括甲肝，乙肝，丙肝，脂肪化，肝癌，肝硬化，酒精性或非酒精性肝病等，肝病是一種常見的對(duì)人類的生活有著極大危害疾病。中國是肝病發(fā)病率最大的國家之一，有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)近年來肝炎、脂肪肝、藥物性肝損害、肝癌肝硬化等肝病已威脅人類的健康生活，其中以病毒性肝炎的發(fā)病率最高，發(fā)病率逐年增長。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)對(duì)肝病死亡率的研究，在過去20年里，全世界因肝硬化和肝癌死亡的總?cè)藬?shù)每年增加5000萬。經(jīng)過多年的研究，我們國家的肝臟疾病譜存在著如下的特點(diǎn)：一是肝病種類豐富，至少有100多種；二是感染性肝病仍然是比重大；三是感染肝病的年齡年輕化；四是非感染肝病的種類呈現(xiàn)明顯上升的趨勢。

針對(duì)上述肝病，全球藥企及科研單位積極投入大量人力和物力，力求能研制出具有良好治療效果的藥物。但目前肝病藥物研制前期主要采用普通動(dòng)物造模進(jìn)行藥物進(jìn)行初步的篩選和藥效評(píng)價(jià)，比如小鼠模型，但畢竟動(dòng)物的肝臟與人類的肝臟存在相當(dāng)大的差異，因此，不能很好的模擬人肝臟對(duì)藥物的反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要提供一種人源化肝臟動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。

此外，還提供一種人源化肝臟動(dòng)物模型及應(yīng)用。

一種人源化肝臟動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

將人源肝祖細(xì)胞注射入肝臟經(jīng)部分切除的免疫缺陷動(dòng)物中，得到人源化肝臟動(dòng)物模型。

上述人源化肝臟動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，采用肝臟經(jīng)部分切除的免疫缺陷動(dòng)物為構(gòu)建模型的對(duì)象進(jìn)行人源肝祖細(xì)胞注射而構(gòu)建人源化肝臟動(dòng)物模型，一方面避免在人源肝祖細(xì)胞注射入動(dòng)物體內(nèi)后因異種的免疫排斥而對(duì)動(dòng)物進(jìn)行環(huán)孢素A、放射線等免疫抑制而帶來的模型構(gòu)建完成之后的應(yīng)用局限；另一方面也避免了使用藥物、病毒、細(xì)菌等造成肝損傷后對(duì)建模之后的應(yīng)用帶來的干擾。而且，經(jīng)證實(shí)，按照該構(gòu)建方法的到的該人源化肝臟動(dòng)物模型具有人膽管結(jié)構(gòu)，表明構(gòu)建的人源化肝臟動(dòng)物模型具有肝臟的功能，能夠?yàn)榕R床上肝病研究或者新藥代謝性研究提供了一種可行的動(dòng)物模型支撐，對(duì)于肝臟再生和相關(guān)研究都有重要的意義。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，在所述將人源肝祖細(xì)胞注射入肝臟經(jīng)部分切除的免疫缺陷動(dòng)物中的步驟中，所述人源肝祖細(xì)胞的用量為1×10⁶個(gè)/只動(dòng)物～1×10⁷個(gè)/只動(dòng)物。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括所述人源肝祖細(xì)胞的獲取步驟：

將人干細(xì)胞在肝細(xì)胞分化培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)分化，其中，所述肝細(xì)胞分化培養(yǎng)基中包括肝細(xì)胞生長因子、纖維生長因子及表皮生長因子。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述肝細(xì)胞生長因子的質(zhì)量體積濃度為10μg/L～40μg/L；所述纖維生長因子的質(zhì)量體積濃度為10μg/L～20μg/L；所述表皮生長因子的質(zhì)量體積濃度為10μg/L～20μg/L。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述免疫缺陷動(dòng)物的被切除的肝臟的質(zhì)量為所述免疫缺陷動(dòng)物原始肝臟的質(zhì)量的50％～70％。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述免疫缺陷動(dòng)物為免疫缺陷小鼠或免疫缺陷大鼠。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述免疫缺陷小鼠選自Nude小鼠、SCID小鼠、NOD-SCID小鼠、NSI小鼠、NCG小鼠、Rag2小鼠及IL2RG小鼠中的一種。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述免疫缺陷動(dòng)物為NCG小鼠。