[發明專利]一種不含甲氨喋呤和含甲氨蝶呤的聚乙二醇化聚L-賴氨酸-羥基喜樹堿納米粒的制備方法

有效

• 申請號: 201910083697.6
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN109833484B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 陶曉軍;凡學龍;楊小平;陳瑤;王榮;楊珊伊
• 申請（專利權）人: 湖南師范大學
• 主分類號: A61K47/60
• 分類號: A61K47/60;A61K47/64;A61K47/69;A61K9/51;A61K47/34;A61K31/519;A61K31/4745;A61P35/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏;周棟

1.一種不含甲氨蝶呤和含甲氨蝶呤的聚乙二醇化聚L-賴氨酸-羥基喜樹堿納米粒的制備方法，其特征在于，所述方法是將PEG和HCPT接枝在PLL骨架上，形成PPH；將PPH在不存在或存在MTX的情況下進行自組裝透析，分別形成PPH NPs和MTX-PPHNPs；所述PEG為聚乙二醇，所述HCPT為10-羥基喜樹堿，所述PLL為聚-L-賴氨酸，所述PPH為聚乙二醇聚-L-賴氨酸羥基喜樹堿聚合物，所述MTX為甲氨蝶呤，所述PPH NPs為PPH納米顆粒；所述MTX-PPH NPs為負載MTX的PPH納米顆粒；

所述PPH的結構式為

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟：

(1)合成PEG-g-PLL；

(2)合成10-HCPT-SA；

(3)將PEG-g-PLL與10-HCPT-SA反應合成PPH；

(4)將PPH溶解在DMF中自組裝為PPH NPs；或者，將PPH溶解在DMF中，將MTX溶解在DMF中，將溶解有PPH的DMF加入溶解有MTX的DMF中，自組裝后得到MTX-PPH NPs；其中SA為琥珀酸酐。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述合成PEG-g-PLL是將SA和DMAP溶于無水CH2Cl2中，SA、DMAP、無水CH2Cl2的比為1mM:1mM:10mL，在60℃回流加熱后，加入PEG并繼續加熱并攪拌，得溶液；將溶液用乙醚沉淀，然后過濾，干燥后將白色粉末溶于去離子水中，然后用水透析，再將溶液凍干；PEG-g-PLL通過PEG-SA的羧酸基團與PLL的胺基團在PEG/L-賴氨酸摩爾比為1:20下綴合而產生；

將PEG-SA，NHS和EDCI溶解在DMSO中，PEG-SA、NHS、EDCI的比為1mM:1.25mM:0.125mM，在室溫下攪拌，得反應溶液A，將PLL溶解在去離子水中，PLL、去離子水的比為0.25g:1mL，并滴加到反應溶液A中,按照1mL:1mL的比例，并將pH調節至6.5，然后在室溫下攪拌，再通過使用MW＝8-14kDa的透析袋來純化樣品，將純化的樣品冷凍干燥以備使用。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述合成10-HCPT-SA是將SA和DMAP溶解于純CH2Cl2溶劑中，SA、DMAP、純CH2Cl2溶劑的比為1mM:1mM:300mL，攪拌后，加入HCPT，按照0.4mM:0.5mM的比例，室溫21～25℃N2保護下攪拌48h，用旋轉蒸發儀除去溶劑，得到了粗產物，將HCPT-SA、EDCI和NHS,按照1mM：1.2mM：1.2mM的比例,溶于純DMSO中，室溫下攪拌后，得反應溶液B。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述將比值為0.086mM:0.2mM的PEG-g-PLL與10-HCPT-SA反應合成PPH是將PEG-g-PLL加入反應溶液B中，在室溫和N2保護下攪拌，然后將反應混合物放入MW＝8～14kDa的透析袋中，用50％DMSO溶液透析，再用去離子水透析，最后將溶液凍干，得到淡黃色疏松粉末狀的PPH。

6.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述將PPH溶解在DMF中自組裝為PPH NPs是將10mg PPH在37℃時溶解在10mLDMF中，按照1mg:1mL的比例，然后用MW＝8～14kDa的透析袋在蒸餾水透析，6h內換10次透析袋，然后使用探針式聲波發生器在100W下對溶液進行聲波處理，并在冰水中脈沖，得自組裝的PPHNPs；將自組裝PPHNPs用0.45μm薄膜過濾，在4℃下儲存。

7.如權利要求2所述的方法，其特征在于，將10mg PPH在37℃時溶解在8mLDMF中，按照比例為5mL:4mL，將2mgMTX溶解在2mLDMF，將上述溶解有PPH的DMF加入溶解有MTX的DMF中，按照4:1的比例，自組裝后得到MTX-PPH NPs，將MTX-PPH NPs用MW＝7kDa的透析袋在蒸餾水中透析6h,換透析袋10次，得到純的MTX-PPH NPs，在4℃儲存。