[發(fā)明專利]一種用于風(fēng)信子屬植物根尖染色體熒光原位雜交染色體制片的處理方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910083599.2 | 申請日: | 2019-01-29 |
| 公開(公告)號: | CN109576348B | 公開(公告)日: | 2022-02-18 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 胡鳳榮;蘇曉倩;張鴿香;丁彥芬 | 申請(專利權(quán))人: | 南京林業(yè)大學(xué) |
| 主分類號: | C12Q1/6806 | 分類號: | C12Q1/6806;C12Q1/6841 |
| 代理公司: | 濟南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218 | 代理人: | 王翠翠 |
| 地址: | 210037 江*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 用于 風(fēng)信子 植物 根尖 染色體 熒光 原位雜交 制片 處理 方法 | ||
1.一種用于風(fēng)信子屬植物根尖染色體熒光原位雜交的染色體制片的處理方法,其特征在于,包括以下步驟:
一、風(fēng)信子染色體制片;
(1)選取水培風(fēng)信子根尖,當(dāng)水培根系長達1cm時,在9:00-11:00剪取水培根尖放入10ml盛有預(yù)處理液的離心管中,進行預(yù)處理;
(2)預(yù)處理液由0.2%秋水仙素與0.002 M 8-羥基喹啉混合液1:1配制而成,處理20 h后轉(zhuǎn)至卡諾氏固定液I固定24 h,4℃貯存?zhèn)溆茫潭ㄒ篒為無水乙醇:冰乙酸的體積比3:1;
(3)隨機選取風(fēng)信子品種各10條根,45%乙酸解離1.5-2h;
(4)45%乙酸壓片:取一條解離后的根,先切去根冠,再將分生區(qū)域橫切為0.1 mm的薄片,取三張薄片平置于一片一側(cè)帶毛邊的干凈載玻片上,滴一滴45%乙酸溶液,20mm× 20mm的蓋玻片蓋片,壓住蓋片一角,用解剖針垂直敲擊分生薄片區(qū)域,待根切片全部分散,酒精燈烤片至霧氣將散,濾紙吸干,垂直用力壓片;
(5)Olympus BX41相差顯微鏡鏡檢,選取分裂相較好的染色體制片備用;
(6)揭片:①冷凍揭片,超低溫冰箱-70℃冷凍過夜;②液氮揭片,液氮處理30秒,揭片后立即放入無水乙醇脫水半小時以上,氣干,室溫貯藏備用;
二、染色體制片處理:染色體制片處理液配制,染色體制片處理;
所述的染色體制片處理液配制的步驟為:
(1)RNA酶A:濃度25mg/mL,用1×TE 進行溶解,-20℃保存?zhèn)溆茫褂们坝?×SSC稀釋至終濃度50μg/μL;
(2)4%胃蛋白酶:用0 .1 mol/L HCl進行溶解,4℃保存,使用前用0 .1 mol/L HCl稀釋至終濃度50 mg/ml;
(3)4%多聚甲醛:ddH2O 900μl和1mol/L NaOH 500μl加熱至65~70℃,加入多聚甲醛40g,加熱并攪拌直到充分溶解,冷卻至室溫,加入100μl 10×PBS,加HCl調(diào)至pH7.3,抽慮滅菌后分裝,4℃避光保存;
所述的染色體制片處理的步驟為:
將染色體制片置于50 μg/μL RNA酶A的2×SSC溶液中,37℃酶解 30-40 min;轉(zhuǎn)入4%胃蛋白酶的0 .1 mol/L鹽酸溶液中,37℃酶解6-8 min;再轉(zhuǎn)入4%多聚甲醛溶液中,室溫避光處理10 min;然后70%、95%、100%乙醇中梯度脫水各3 min,氣干,室溫貯藏備用,處理過程中要保證染色體標(biāo)本全部浸在處理液中;
所述的染色體為5S rDNA。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息,商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于南京林業(yè)大學(xué),未經(jīng)南京林業(yè)大學(xué)許可,擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作,請聯(lián)系【客服】
本文鏈接:http://www.szxzyx.cn/pat/books/201910083599.2/1.html,轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 彩色植物集成材及其制造方法
- 鑒定表現(xiàn)出變色減輕的植物材料的方法,由此鑒定的植物以及該鑒定的植物用于生產(chǎn)表現(xiàn)出變色減輕的經(jīng)濟作物的用途
- 用于寄生體控制的植物miRNA的過表達
- 鑒定表現(xiàn)出變色減輕的植物材料的方法以及該鑒定的植物用于生產(chǎn)經(jīng)濟作物的用途
- 植物品種識別方法及裝置
- 一種生物水體凈化裝置
- 一種基于機器學(xué)習(xí)的植物智能培育系統(tǒng)及方法
- 基于水體污染的生態(tài)植物配置修復(fù)系統(tǒng)
- 用于改善植物的保護、生長和生產(chǎn)力的生物活性多肽
- 植物生長監(jiān)控系統(tǒng)





