[發明專利]一種產多酶的雙菌制劑的制備及其應用方法

在審

• 申請號: 201910083119.2
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109797117A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 何臘平;帥瑤;陶菡
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A24B15/20;C12R1/07
• 代理公司: 貴陽中工知識產權代理事務所 52106
• 代理人: 劉安寧

一種產多酶的雙菌制劑，是由解淀粉芽孢桿菌GUHP?86與解淀粉芽孢桿菌GZU03制得的，制備方法包括(1)種子液培養基配制和滅菌；(2)配制單一制劑；(3)配制產多酶的雙菌制劑。產多酶雙菌制劑的應用方法是將煙葉置于密封袋內，分別吸取兩種單一制劑用于煙葉，控制產多酶的雙菌制劑總體積，又取有糖鹽溶液于煙葉中，充分混勻，于培養箱內進行培養，每天定時換氣，且當濕度降低時須補加有糖鹽溶液。本發明的產多酶的雙菌制劑，在煙草發酵過程中能夠提高納豆激酶、蛋白酶和淀粉酶活性，從而提高煙葉品質，不僅大大提高口含煙食用價值，同時還可以強化發酵過程。本發明方法適用于對口含煙品質的改善。

技術領域

本發明涉及微生物，也涉及煙草，進一步來說，涉及由兩種桿菌制成的制劑在煙草加工的應用方法。

背景技術

口含煙(Snus)是一種含有尼古丁的無煙煙草制品，由磨成粉末的煙草再加鹽和水混合而成，有時也會加入香料，如香檸檬油、玫瑰油或甘草。口含煙是煙的一種重要補充形式，通常放置在唇部和牙齦之間消費,或者放入口中咀嚼使用。袋裝口含煙一般是由晾煙或明火烤煙經過粉碎、熱處理和包裝加工而成的一種潮濕的煙粉或煙絲狀煙草制品,使用時含在唇齦之間。

口含煙原料是應響口含煙品質的主要因素。口含煙原料具有刺激性大、青雜氣重和香味不協調等缺點。改善口含煙質量可通過微生物發酵。通過微生物發酵，可改善口含煙原料刺激性、香味不協調等缺點，得到香氣質更好的口含煙產品。通過微生物代謝，消耗煙草本身蛋白質、纖維素及淀粉等不良成分，同時，微生物代謝過程中往往會產生功效性成分，如產生多種酶，有些酶本身對提高煙葉的香氣有幫助，如蛋白酶可以水解煙葉中的蛋白質，水解產物和進一步轉化的產物可以產生煙草致香物質；有些酶是對人體健康有益的酶，如淀粉酶對消化系統起著很重要的作用。因此接種合適的功能菌，產生一些功能活性酶，提高煙葉的香氣量等品質，使雜氣、刺激性下降，具有更好的食用舒適性。

目前將微生物用于口含煙的專利技術僅有ZL2016103176476號《適用于口含煙的煙絲的制備方法及應用》，該技術將合理配方的煙葉組經科學合理的微生物發酵降解煙草中的部分大分子物質，有效降低煙絲苦澀味和辛辣味，并具有柔和與協調的感官特性，所用的菌種為紅曲霉(Monascus purpureus Went.)、魯氏毛霉(Mucor roxianus)或根霉(Rhizopus)或乳酸菌(Lactobacillus)的一種或幾種。迄今為止，尚無將解淀粉芽孢桿菌用于煙草提質增香的專利申請件。

發明內容

本發明旨在提供一種產多酶的雙菌制劑的制備方法，將兩種解淀粉芽孢桿菌分別制成可以用于煙草提質增香的制劑。

本發明的又一目的是提供上述制劑的應用方法，使其在口含煙品質改善方面得到實際應用。

發明人提供的產多酶的雙菌制劑，是由解淀粉芽孢桿菌GUHP-86與解淀粉芽孢桿菌GZU03制得的混合制劑，其制備方法包括以下步驟：

(1)種子液培養基配制和滅菌

按下面配方配制培養基：胰蛋白胨1.25g/L、酵母提取物0.625g/L、NaCl 6.25g/L、葡萄糖0.625g/L、水1000g；配好后按三角瓶容量的20％分別裝入三角瓶，用121℃高壓蒸汽滅菌20min，待冷卻后分別接入所述解淀粉芽孢桿菌GUHP-86和GZU03于37℃、180r/min下進行培養18h±2h，得到種子液；

(2)配制單一制劑

將所得種子液于2℃～5℃、7000～9000r/min下離心10～20min,收集沉淀并用無菌生理鹽水洗滌所述沉淀，然后向所屬沉淀加入等量的無菌生理鹽水,搖勻，分別得到解淀粉芽孢桿菌GUHP-86和解淀粉芽孢桿菌GZU03的單一制劑；

(3)配制產多酶的雙菌制劑

在使用時分別將兩種解淀粉芽孢桿菌單一制劑按照(4～0)∶(0～4)的體積比例取用，得到產多酶的雙菌制劑；