[發(fā)明專利]一種產(chǎn)多酶的雙菌制劑的制備及其應(yīng)用方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910083119.2
• 申請(qǐng)日: 2019-01-30
• 公開（公告）號(hào): CN109797117A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何臘平;帥瑤;陶菡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A24B15/20;C12R1/07
• 代理公司: 貴陽中工知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 52106
• 代理人: 劉安寧

1.一種產(chǎn)多酶的雙菌制劑，其特征在于它是由解淀粉芽孢桿菌GUHP-86與解淀粉芽孢桿菌GZU03制得的，其制備方法包括以下步驟：

(1)種子液培養(yǎng)基配制和滅菌

按下面配方配制培養(yǎng)基：胰蛋白胨1.25g/L、酵母提取物0.625g/L、NaCl 6.25g/L、葡萄糖0.625g/L、水1000g；配好后按三角瓶容量的20％分別裝入三角瓶，用121℃高壓蒸汽滅菌20min，待冷卻后分別接入所述解淀粉芽孢桿菌GUHP-86和GZU03于37℃、180r/min下進(jìn)行培養(yǎng)18h±2h，得到種子液；

(2)配制單一制劑

將所得種子液于2℃～5℃、7000～9000r/min下離心10～20min,收集沉淀并用無菌生理鹽水洗滌所述沉淀，然后向所屬沉淀加入等量的無菌生理鹽水,搖勻，分別得到解淀粉芽孢桿菌GUHP-86和解淀粉芽孢桿菌GZU03的單一制劑；

(3)配制產(chǎn)多酶的雙菌制劑

在使用時(shí)分別將兩種解淀粉芽孢桿菌單一制劑按照(4～0)∶(0～4)的體積比例取用，得到產(chǎn)多酶的雙菌制劑；

所述解淀粉芽孢桿菌GUHP-86已于2016年1月4日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC M 2016003；所述解淀粉芽孢桿菌GZU03已于2018年1月9日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC M 2018762；保藏單位地址是中國武漢，武漢大學(xué)，其郵編為430072，電話號(hào)碼為027-68754952。

2.如權(quán)利要求1所述產(chǎn)多酶雙菌制劑的應(yīng)用方法，其特征在于該方法是稱取20g煙葉置于14cm×20cm規(guī)格的密封袋內(nèi)，分別吸取兩種單一制劑用于煙葉，控制產(chǎn)多酶的雙菌制劑總體積4m l，又取4mL有糖鹽溶液于煙葉中，充分混勻，于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，每天定時(shí)進(jìn)行換氣，且當(dāng)濕度降低時(shí)須補(bǔ)加有糖鹽溶液。

3.如權(quán)利要求2所述產(chǎn)多酶雙菌制劑的應(yīng)用方法，其特征在于所述有糖鹽溶液制備步驟如下：稱取MgCl₂ 5g、KCl 0.5g、CaCl₂ 0.5g、NaCl 0.5g、葡萄糖2g，補(bǔ)水至1000mL，溶解，得到有糖鹽溶液。

4.如權(quán)利要求2所述產(chǎn)多酶雙菌制劑的應(yīng)用方法，其特征在于所述培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)的時(shí)間為3～15天。