[發明專利]一種提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法

有效

• 申請號: 201910077505.0
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN109628526B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 曾德樺;暨火興;劉原君;王為民
• 申請（專利權）人: 麗珠集團福州福興醫藥有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12R1/19
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢

本發明涉及發酵工程技術領域，具體涉及一種提高N?乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法。發酵過程中，當發酵液的OD_660nm大于或等于25時，按照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L?天門冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至發酵結束，所述半乳糖和L?天門冬氨酸的質量比為25:3。本發明在發酵培養過程中，當OD_660nm大于或等于25時流加半乳糖和L?天門冬氨酸的混合液，控制半乳糖和L?天門冬氨酸的濃度和比例，通過在半乳糖中添加L?天門冬氨酸使得glmS與gfa1過量表達增加氨基葡萄糖的積累濃度，最后將N?乙酰氨基葡萄糖產量提高至120g/L。

技術領域

本發明涉及發酵工程技術領域，具體涉及一種提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法。

背景技術

N-乙酰氨基葡萄糖是葡萄糖的一種衍生物，是在葡萄糖二號的羥基被乙酰氨基取代的產物，在自然界中廣泛存在。目前，國內關于N-乙酰氨基葡萄糖的獲取方法主要有化學法和生物法兩種，其中生物法是通過微生物發酵法合成N-乙酰氨基葡萄糖，其優點在于生產時間短，效率高，沒有魚腥味。但是發酵法合成N-乙酰氨基葡萄糖存在積累的氨基葡萄糖或N-乙酰氨基葡萄糖會被細胞從胞外轉入胞內作為碳源利用使得發酵液中無法大量積累N-乙酰氨基葡萄糖。

公開號為CN104988196A的中國發明專利公開了一種N-乙酰氨基葡萄糖的發酵生產方法，在發酵過程，當發酵液的殘糖含量將至0.5g/L以下時，向發酵液中流加葡糖糖溶液，當發酵液的OD_660nm＝25～28時，加入IPTG進行誘導，顯著提高了發酵終點N-乙酰氨基葡萄糖含量和轉化率，然而補加IPTG誘導劑進行誘導表達外源蛋白有以下缺點：(1)IPTG具有一定的毒性且價格昂貴。(2)IPTG是通過過濾后溶解于無菌水中，在此過程中有染菌的風險不利于規模化生產。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，當OD_660nm大于或等于25時流加半乳糖和L-天門冬氨酸的混合液，將N-乙酰氨基葡萄糖產量提高至120g/L。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，發酵過程中，當發酵液的OD_660nm大于或等于25時，按照前5h以5mL/h流加速度流加半乳糖和L-天門冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至發酵結束，所述半乳糖和L-天門冬氨酸的質量比為25:3。

本發明的有益效果在于：本發明在發酵培養過程中，當OD_660nm大于或等于25時流加半乳糖和L-天門冬氨酸的混合液，控制半乳糖和L-天門冬氨酸的濃度和比例，通過在半乳糖中添加L-天門冬氨酸使得glmS與gfa1過量表達增加氨基葡萄糖的積累濃度，最后將N-乙酰氨基葡萄糖產量提高至120g/L。

具體實施方式

為詳細說明本發明的技術內容、所實現目的及效果，以下結合實施方式予以說明。

本發明最關鍵的構思在于：在發酵培養過程中，當OD_660nm大于或等于25時流加半乳糖和L-天門冬氨酸的混合液，使得glmS與gfa1過量表達增加氨基葡萄糖的積累濃度，最后將N-乙酰氨基葡萄糖產量提高至120g/L。

本發明提供一種提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，發酵過程中，當發酵液的OD_660nm大于或等于25時，按照前5h以5mL/h流加速度流加半乳糖和L-天門冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至發酵結束，所述半乳糖和L-天門冬氨酸的質量比為25:3，即25g半乳糖和3gL-天門冬氨酸溶于300mL的水中，在高壓滅菌鍋中121℃滅菌25min。