[發明專利]一種提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法

有效

• 申請號: 201910077505.0
• 申請日: 2019-01-28
• 公開（公告）號: CN109628526B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 曾德樺;暨火興;劉原君;王為民
• 申請（專利權）人: 麗珠集團福州福興醫藥有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12R1/19
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢

1.一種提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

將成熟的N-乙酰氨基葡萄糖種子液按照12～15％接種量接種到含有發酵培養基的發酵罐中培養，控制發酵溫度36-38℃，罐壓0.03-0.05Mpa，攪拌轉速250-450rpm，通氣比0.6-1.0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6.8；

當發酵液的OD660nm大于或等于25時，按照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天門冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至發酵結束，所述半乳糖和L-天門冬氨酸的質量比為25:3。

2.根據權利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，其特征在于，所述混合液的體積與發酵液的體積比為1:100。

3.根據權利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，其特征在于，所述發酵培養基原料包括：

葡萄糖0.54％，硫酸銨0.35％，磷酸二氫鉀1.0％，硫酸鎂0.26％，穩定劑0.46％，消泡劑0.05％，氧化鈣0.0046％和微量元素0.18％；

所述微量元素為七水硫酸鐵5.00g/L、硼酸0.10g/L、一水硫酸錳0.10g/L、七水硫酸鋅3.80g/L、二水鉬酸鈉0.10g/L和硫酸鈷0.10g/L的混合液。

4.根據權利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，其特征在于，所述成熟的N-乙酰氨基葡萄糖種子液的制備方法為：

配制種子培養基，控制溫度36-38℃，罐壓0.03-0.05Mpa，攪拌轉速300-400rpm，通氣比1.0-1.2v/v/m，接入產N-乙酰氨基葡萄糖大腸桿菌進行培養，培養周期為9～12h，pH下降至6.4～6.5，種子液的OD_660nm大于或等于1時視為種子成熟。

5.根據權利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，其特征在于，所述種子培養基原料包括：

葡萄糖1.0％、硫酸銨0.18％、磷酸二氫鉀0.9％、硫酸鎂0.25％、穩定劑0.36％和消泡劑0.1％。

6.根據權利要求3或5所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，其特征在于，所述穩定劑為一水檸檬酸，所述消泡劑為有機硅。

7.根據權利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖產量的發酵方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

配制種子培養基，控制溫度36-38℃，罐壓0.03-0.05Mpa，攪拌轉速300-400rpm，通氣比1.0-1.2v/v/m，接入產N-乙酰氨基葡萄糖大腸桿菌進行培養，培養周期為9～12h，pH下降至6.4～6.5，種子液的OD_660nm大于或等于1時視為種子成熟；

將成熟的N-乙酰氨基葡萄糖種子液按照12～15％接種量接種到含有發酵培養基的發酵罐中培養，控制發酵溫度36-38℃，罐壓0.03-0.05Mpa，攪拌轉速250-450rpm，通氣比0.6-1.0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6.8；

所述發酵培養基原料包括：葡萄糖0.54％，硫酸銨0.35％，磷酸二氫鉀1.0％，硫酸鎂0.26％，穩定劑0.46％，消泡劑0.05％，氧化鈣0.0046％和微量元素0.18％；

所述微量元素為七水硫酸鐵5.00g/L、硼酸0.10g/L、一水硫酸錳0.10g/L、七水硫酸鋅3.80g/L、二水鉬酸鈉0.10g/L和硫酸鈷0.10g/L的混合液；

當0.54％的葡萄糖耗至0.05％～0.06％時開始流加質量濃度為75％的葡萄糖，使培養過程中的殘糖維持在0.01-0.08％；

當發酵液的OD_660nm大于或等于25時，按照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天門冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至發酵結束，所述半乳糖和L-天門冬氨酸的質量比為25:3，所述混合液的體積與發酵液的體積比為1:100。