[發明專利]唑來膦酸及其雜質的高效液相色譜檢測方法

有效

• 申請號: 201910077468.3
• 申請日: 2019-01-25
• 公開（公告）號: CN110161168B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 張鋒;李丹;劉音岑;吳瑤;余啟波;趙忠瓊;韓慶平;王利春;王晶翼
• 申請（專利權）人: 四川科倫藥物研究院有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 錢成岑

本發明提供了一種唑來膦酸及其雜質的高效液相色譜檢測方法，其包括以下色譜條件：所述固定相為辛烷基硅烷鍵合硅膠或十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱；所述流動相為緩沖液與有機溶劑的混合液，其中緩沖液為濃度為5?18mmol/L的焦磷酸鈉和四丁基硫酸氫銨的混合溶液或濃度為5?18mmol/L的焦磷酸鈉和四己基硫酸氫銨的混合溶液，緩沖液pH值為7.5?9.0，有機溶劑為甲醇或乙腈。本發明提供的檢測方法能夠實現唑來膦酸及其雜質的有效分離和檢測，解決了化合物保留和色譜峰拖尾問題。

技術領域

本發明涉及藥物檢測技術領域，特別是涉及一種唑來膦酸原料及其雜質的高效液相色譜檢測方法。

背景技術

唑來膦酸(Zoledronic Acid)為第三代雙膦酸類抗骨質疏松藥物，系瑞士Norvartis公司開發的高血鈣癥治療藥，臨床主要用于治療骨質疏松癥、高鈣血癥以及惡性腫瘤引起的骨相關疾病。該藥2000年10月在加拿大首次上市，迄今為止，該藥已在歐盟、美國等80多個國家或地區獲得批準。近年來發現其可誘導腫瘤細胞的凋亡，有望直接用于治療癌癥。

唑來膦酸作為一類新型的雙膦酸類藥物，化學結構式如式I，其中含兩個膦酸基團，化合物極性極強，在C8、C18等非極性色譜柱上無保留；該類化合物水溶性脂溶性均極差，紫外吸收僅在210nm波長附近存在末端吸收；另外該類化合物結構式中存在氮雜環與雙磷酸結構，在采用以硅膠為載體的色譜柱分析時，結構上的氮原子與色譜柱上殘留的硅醇基及二膦酸基團與色譜上痕量金屬離子作用會造成峰形拖尾嚴重，影響雜質分離與檢測?，F暫無相關文獻報道能同時解決該類化合物無保留與主峰拖尾問題，故有關物質檢查方法建立難度較大，分離雜質數量較少。

目前該類化合物有關物質檢測仍普遍采用高效液相色譜法進行，該類藥物含有兩個膦酸基團，化合物極性極強，在非極性固定相色譜柱上不保留，因此主要通過建立陰離子交換高效液相色譜法和反相離子對高效液相色譜法進行樣品及其雜質分析。

在離子交換高效液相色譜法中，因雙膦酸類藥物是四元膦酸，存在多級電離，為了保證它們以單一的電離形式保留，需要采用強堿或強酸性流動相，并且固定相大多選用價格昂貴的耐強堿或強酸的陰離子交換柱。例如，CN201410330791.4公開了一種雙膦酸類化合物的含量測定方法，用甲酸水溶液作流動相，pH值3.4-3.6，選用陰離子交換色譜柱和示差折光檢測器，分析成本高，且檢測靈敏度差，無法檢出微量的有關物質。CN200810060013.2公開了雙膦酸鹽類藥物及其雜質陰離子的離子色譜分離分析方法，洗脫液為氫氧化鉀溶液，采用梯度淋洗分離，抑制電導檢測器進行檢測。但該類分析方法色譜柱使用壽命短，分析成本高，且需要梯度洗脫，過程繁瑣耗時，化合物保留效果仍然不佳，需要采用特殊的檢測器，方法重現性差，難以在藥品常規分析中應用。

采用反相離子對高效液相色譜法分析該類化合物時，常規離子對試劑增強化合物保留效果不顯著，分離雜質數量有限。CN200510040094.6公開了唑來膦酸原料、凍干及其注射液有關物質和含量的檢驗方法，采用氫氧化四丁基銨水溶液作為反相離子對試劑檢測唑來膦酸含量和有關物質，但未報到有益的技術效果。CN201610794684.6公開了高效液相色譜檢測唑來膦酸注射液中有關物質的方法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相包括磷酸氫二鈉、硫酸氫四己銨、甲醇和乙腈，該方法采用的反相離子對試劑雖然一定程度上解決了化合物保留問題，但色譜峰峰形拖尾問題未能有效解決，導致主峰與雜質峰分離效果不佳，分離雜質數量有限，含量檢測不準確。

因此，如何克服唑來膦酸現有檢測方法的不足，開發一種靈敏度高、分離效果好的唑來膦酸原料及其雜質的高效液相色譜檢測方法成為本領域亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種靈敏度高、分離效果好的唑來膦酸原料及其雜質的的檢測方法。