[發明專利]以幼孢子囊群誘導的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法

有效

• 申請號: 201910073204.0
• 申請日: 2019-01-25
• 公開（公告）號: CN109601387B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 陶佩琳;高政平
• 申請（專利權）人: 徐州生物工程職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 周愛芳

以幼孢子囊群誘導的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法，包括外植體的選擇及表面消毒、綠色球狀體的誘導、綠色球狀體的增殖、綠色球狀體的分化、分化幼苗的壯苗及生根培養和華南紫萁組培苗的煉苗移栽等步驟，為通過組織培養途徑繁育優質華南紫萁商品種苗提供了方法和途徑，成功建立了以華南紫萁未完全展開葉上的幼孢子囊為外植體的組培繁殖方法，通過GGB途徑誘導獲得華南紫萁種苗，誘導時間短，誘導率高，且可周年生產，不受季節限制，解決了常規的孢子繁殖對環境要求高，且收集孢子受限等的問題。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體是一種以幼孢子囊群誘導的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法。

背景技術

華南紫萁（Osmunda vachellii Hook.），真蕨目紫萁科紫萁屬蕨類植物，產于亞洲亞熱帶濕潤地區, 常野生于山地、草叢或溪邊。該種兼具厚囊蕨綱和薄囊蕨綱的特點，是薄囊蕨類中最原始的類群，也是現存的厚囊蕨綱和薄囊蕨綱之間過度類型的少數種類之一。

華南紫萁為陸生蕨類，植株高1-2m，根狀莖粗壯，形成圓柱形主軸。葉簇生頂部，厚紙質，兩面無毛，呈黃綠色，略有光澤；葉柄長15-35厘米，堅硬；葉片長圓形，長30-80 cm，寬15-30 cm；羽片具短柄，著生于葉軸上，披針形或線狀披針形，長15-20 cm，寬1.5 cm，頂端長漸尖，基部狹楔形，近全緣。株型美觀，形似蘇鐵，葉姿態優雅，頗具觀賞價值。其嫩苗、根莖、葉柄殘基等可入藥，具有清熱解毒、止血生肌，健脾利濕，舒筋活絡等功效。

隨著生態文明建設的不斷深入，觀賞蕨類植物作為一種優新園林植物資源，已逐漸成為當今風景園林建設中的新寵兒。華南紫萁樹形美觀，作為現存少有的木本蕨類之一，在蕨類植物造景和生態綠化中的作用舉足輕重，可供庭園、綠化帶栽植或室內盆栽觀賞，終冬不凋。但是，它們的自然繁殖能力差，且伴隨著生態環境的惡化和采挖現象時有發生，野生種群面臨大威脅。該物種的瀕危性及其野生繁育的局限性是制約其深入開發和利用的重要因素。積極開展華南紫萁的人工快速繁殖研究，不但可以減少野外亂采濫挖現象，保護野生種質資源，而且可以擴大其園林綠化應用范圍，提高觀賞蕨類植物在園林中的比重，豐富園林綠地的生態內涵。

華南紫萁的人工繁育主要以孢子繁殖為主。該方法對繁殖環境條件要求高，周期長，且孢子獲得受季節限制，成苗率有限。利用組織培養技術可以有效地解決上述問題。但目前，蕨類植物組培研究的瓶頸主要集中在以下兩個方面：一是多數蕨類植物直接從地栽的活體植株上很難獲得合適的外植體，誘導難度極大；二是以綠色球狀體（簡稱綠球體，Green Globular Body，GGB）途徑進行組培繁殖（外植體一綠色球狀體一植株）時，綠球體的誘導是關鍵技術。蕨類植物綠色球狀體是指由蕨類植物外植體誘導得到的由眾多綠色顆粒組成的球狀體，其本質是分生組織集合體，接種于分化培養基上可以獲得大量蕨類植物幼苗。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服上述現有技術之不足，提供一種以幼孢子囊群成功誘導綠色球狀體，獲得大量華南紫萁種苗的方法，為其快速繁殖和規?；a奠定基礎，以滿足生態及市場需求。

本發明是以如下技術方案實現的：以幼孢子囊群誘導的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法，包括以下步驟：

（1）外植體的選擇及表面消毒：選取帶有幼孢子囊群的華南紫萁未完全展開葉片，輕輕去除表面污垢，經流水沖洗干凈后轉入75％乙醇浸泡20 s，再用0.1％氯化汞振蕩清洗2-4 min，無菌水沖洗5-7次，得華南紫萁無菌幼葉孢子囊外植體；

（2）綠色球狀體的誘導：將步驟（1）獲得的華南紫萁無菌幼葉孢子囊外植體首尾切除，剪成2 cm小段，按照極性方向小心接種到GGB誘導培養基中；將接種好的材料置于光照培養架上進行培養；培養7-10天，在培養基表面可以觀察到很多從孢子囊群中散落下來的綠色孢子，繼續培養2周，孢子逐漸膨大形成華南紫萁綠色球狀體；