[發(fā)明專利]以幼孢子囊群誘導(dǎo)的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910073204.0
• 申請(qǐng)日: 2019-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN109601387B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陶佩琳;高政平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 徐州市三聯(lián)專利事務(wù)所 32220
• 代理人: 周愛芳

1.以幼孢子囊群誘導(dǎo)的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）外植體的選擇及表面消毒：選取帶有幼孢子囊群的華南紫萁未完全展開葉片，輕輕去除表面污垢，經(jīng)流水沖洗干凈后轉(zhuǎn)入75％乙醇浸泡20 s，再用0.1％氯化汞振蕩清洗2-4min，無(wú)菌水沖洗5-7次，得華南紫萁無(wú)菌幼葉孢子囊外植體；

（2）綠色球狀體的誘導(dǎo)：將步驟（1）獲得的華南紫萁無(wú)菌幼葉孢子囊外植體首尾切除，剪成2 cm小段，按照極性方向小心接種到GGB誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；將接種好的材料置于光照培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)7-10天，在培養(yǎng)基表面可以觀察到很多從孢子囊群中散落下來(lái)的綠色孢子，繼續(xù)培養(yǎng)2周，孢子逐漸膨大形成華南紫萁綠色球狀體；其中，培養(yǎng)基配方為B5+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA +30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，pH為5.8；光照培養(yǎng)控制溫度為23-27℃，濕度為75％-85％，光照強(qiáng)度為2000-3000 lx，每日光照14 h；

（3）綠色球狀體的增殖：步驟（2）中獲得的綠色球狀體分割成直徑為3-5 mm大小的綠球體小塊，接種于綠色球狀體增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)時(shí)間為30天，得到增殖的華南紫萁綠色球狀體；培養(yǎng)條件同步驟（2）；其中增殖培養(yǎng)基配方為B5+0.2-1.0 mg/L 6-BA + 0.1-0.5 mg/LNAA +30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，pH為5.8；

（4）綠色球狀體的分化：將步驟（3）增殖得到的華南紫萁綠色球狀體切割成5 mm大小的綠球體小塊，接種于綠色球狀體分化培養(yǎng)基上，培養(yǎng)時(shí)間為30天，得到分化幼苗；培養(yǎng)條件同步驟（2）；其中綠色球狀體分化培養(yǎng)基為1/2MS+0.2-1.0 mg/L 6-BA + 0.1-0.5 mg/LNAA +0-1.5 g/L活性炭+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，pH為5.8；

（5）分化幼苗的壯苗及生根培養(yǎng)：將步驟（4）獲得的華南紫萁分化幼苗接種于壯苗及生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)60天，每30天更換一次新的壯苗生根培養(yǎng)基，得到植株高度為2-3 cm的生根組培苗；培養(yǎng)條件同步驟（2）；其中壯苗及生根培養(yǎng)基為：1/2MS + 0.1-0.5 mg/L NAA +0-1.5 g/L活性炭+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，pH為5.8；

（6）華南紫萁組培苗的煉苗移栽：待步驟（5）所述組培苗高度達(dá)到3-4 cm時(shí)，將其放在溫度為20-25°C、光照強(qiáng)度2000 lx，每日光照12 h的條件下進(jìn)行煉苗；之后將組培苗小心取出，去除根部培養(yǎng)基，并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 125%多菌靈溶液清洗根部，種植于育苗缽內(nèi)，放置于溫室大棚內(nèi)，控制溫度為20-25°C，在自然光照下生長(zhǎng)20天，即得到華南紫萁商品種苗。

2.如權(quán)利要求1所述的以幼孢子囊群誘導(dǎo)的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法，其特征在于：步驟（1）中用軟毛刷蘸1%體積分?jǐn)?shù)的洗潔精水輕輕去除表面污垢。

3.如權(quán)利要求1所述的以幼孢子囊群誘導(dǎo)的GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法，其特征在于：步驟（6）中育苗缽內(nèi)的基質(zhì)為消過毒的泥炭和火山巖的混合基質(zhì)，泥炭和火山巖的體積比為3: 1。