[發明專利]一種重組醛酮還原酶突變體及應用

有效

• 申請號: 201910072740.9
• 申請日: 2019-01-25
• 公開（公告）號: CN110004120B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 王亞軍;喻寒;邱帥;程峰;鄭裕國
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12P13/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種重組醛酮還原酶突變體，其特征在于所述醛酮還原酶突變體將SEQ ID NO.2所示氨基酸序列突變為下列之一：(1)第29位賴氨酸突變為組氨酸或精氨酸；(2)第28位酪氨酸突變為丙氨酸或組氨酸；(3)第29位賴氨酸替換成組氨酸且第28位酪氨酸替換成丙氨酸。

2.一種權利要求1所述重組醛酮還原酶突變體在不對稱還原6-氰基-(5R)-羥基-3-羰基己酸叔丁酯制備6-氰基-(3R,5R)-二羥基己酸叔丁酯中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述應用的方法為：將含重組醛酮還原酶突變體基因的工程菌經誘導培養獲得的濕菌體和含葡萄糖脫氫酶基因的工程菌經誘導培養獲得的濕菌體混合的混合菌體為催化劑，以6-氰基-(5R)-羥基-3-羰基己酸叔丁酯為底物，以葡萄糖為輔底物，以pH 7.0、100mM PBS緩沖液為反應介質構成轉化體系，在35℃、400-600rpm條件下進行反應，反應結束，反應液分離純化，獲得6-氰基-(3R,5R)-二羥基己酸叔丁酯。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述轉化體系中，底物終濃度100-200g/L，葡萄糖終濃度150-300g/L，催化劑用量以混合菌體總量干重計為20-30g DCW/L，所述混合菌體中含醛酮還原酶突變體基因的工程菌經誘導培養獲得的濕菌體與含葡萄糖脫氫酶基因的工程菌經誘導培養獲得的濕菌體的干重比為1.0-5.0:1。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述濕菌體按如下方法制備：將含重組醛酮還原酶突變體基因的工程菌接種到含終濃度50μg/mL卡那霉素的LB液體培養基中，37℃培養10h，以體積濃度1.5％的接種量接種到新鮮的含終濃度50μg/mL卡那霉素的LB液體培養基中，37℃、180rpm培養2h，再向培養液中加入終濃度為0.15mM IPTG，28℃培養12h后，4℃、8000rpm離心10min，獲得含重組醛酮還原酶突變體的濕菌體；所述含葡萄糖脫氫酶基因的工程菌經誘導培養獲得的濕菌體制備方法同含醛酮還原酶突變體基因的濕菌體。