[發明專利]一種基于靶標親和性的“一體化”中藥活性成分篩選方法

在審

• 申請號: 201910070022.8
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN110018265A
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 李德強;孔德志;尹星爍;張學琴
• 申請（專利權）人: 河北醫科大學第二醫院
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/96;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/12
• 代理公司: 北京集智東方知識產權代理有限公司 11578
• 代理人: 孫文彬

本發明公開了一種基于靶標親和性的“一體化”中藥活性成分篩選方法，該方法主要包括(1)將天然產物混合物備選庫樣品與靶分子接觸，(2)將未與靶分子結合的雜質截留，與靶分子親和的復合物通過，(3)將與靶分子親和的復合物解離，洗脫靶分子，獲取結合成分(群)，(4)將結合成分(群)進行定性分析等步驟。該方法通過在線“一體化”的方式實現了從中藥等復雜體系中快速、高效地篩選出活性成分的全過程的自動化控制，可快速篩選中藥活性成分并進行定性分析。

技術領域

本發明涉及一種基于靶標親和性的“一體化”中藥活性成分篩選方法。

背景技術

如何從中藥等復雜體系中快速、高效地篩選出活性成分，是現代藥物研究的重要領域之一。傳統的化學分離、結構鑒定、活性篩選模式到活性導向化學分離存在目標不明確、操作繁瑣、工作量大、周期長、活性成分在分離過程中易丟失等諸多不足。

現代藥理學研究表明，藥物與生物大分子(如酶、受體、DNA、RNA等)的親和是其發揮作用的第一步。

本發明人經過研究發現，一種基于靶標親和性的“一體化”中藥活性成分篩選方法實現了親和篩選過程的完全自動化，可以提高復雜分離速度和最小化蛋白質用量，提高對假陽性或甚至弱結合配體的檢測能力，實現對具有不同靶標親和力的同類型小分子化合物庫進行快速篩選，并評價其構效關系，且未見相關研究報道，特申請此發明專利。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于靶標親和性的“一體化”中藥活性成分篩選方法。

本發明所提供的方法包括如下步驟：(1)將天然產物混合物備選庫樣品與靶分子接觸，(2)將未與靶分子結合的雜質截留，與靶分子親和的復合物通過，(3)將與靶分子親和的復合物解離，洗脫靶分子，獲取結合成分(群)，(4)將結合成分(群)進行定性分析。在線“一體化”方法將上述4個步驟有機整合成，實現了全過程的自動化控制。

本發明所述方法優選包括如下步驟：(1)將天然產物混合物備選庫樣品與靶分子接觸，(2)使用反相功能的渦流色譜柱將未與靶分子結合的雜質截留，與靶分子親和的復合物通過，(3)將與靶分子親和的復合物解離，使用離子交換/反相混合功能的渦流色譜洗脫靶分子，獲取結合成分(群)，(4)使用液相色譜質聯用體系將結合成分(群)進行定性分析。

本發明所述方法優選還包括如下步驟：(5)靶分子的優化和進一步的生物學實驗。

本發明所述天然產物混合物備選庫的制備包括如下步驟：(a)取一定量的初級原料，用乙醇溶液回流提取，合并提取液，濃縮得浸膏；對于微生物代謝產物的提取物制備，則是將含有適量微生物的培養液過濾，得到固體微生物菌絲體和培養液濾液，菌絲體再用丙酮溶液超聲破碎，過濾，濾液濃縮得浸膏，此浸膏與培養液濾液都分別作為微生物代謝產物的提取物進行下一步的處理；(b)稱取一定量步驟(a)中所得的浸膏，用雙蒸水懸浮，用有機溶劑萃取，分離有機溶劑相和水相；合并水相，備用；合并每次有機溶劑萃取物，蒸除有機溶劑，得到干膏狀有機溶劑相成分，備用；對于微生物提取物的培養液濾液部分則直接用有機溶劑萃取，合并每次有機溶劑萃取物，蒸除有機溶劑，得到干膏狀有機溶劑相成分，備用；(c)將步驟(b)中萃取后的水相部分蒸除水中溶解的少量有機溶劑，用大孔樹脂柱層析分離，用水為流動相洗脫，棄去水洗部分；用乙醇溶液洗脫，將乙醇溶液洗脫部分蒸除溶劑，得干膏狀樣品備用；(d)上述步驟(b)中制得的干膏狀有機溶劑相部分、步驟(c)中制得的干膏狀樣品為天然產物混合物備選樣品，構成一份初級原料所提供的天然產物混合物備選樣品，所有初級原料提供的天然產物混合物備選樣品即組成了本天然產物混合物備選庫。

優選的，步驟(a)中，當初級原料為中藥處方時，除用乙醇溶液回流提取，得浸膏外，還另取初級原料，用水煎煮，煎煮液合并，濃縮得浸膏；用乙醇溶液和水提取得到的兩份浸膏，都分別作為中藥處方的提取物浸膏進行下一步的處理。