[發明專利]一種基于靶標親和性的“一體化”中藥活性成分篩選方法

在審

• 申請號: 201910070022.8
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN110018265A
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 李德強;孔德志;尹星爍;張學琴
• 申請（專利權）人: 河北醫科大學第二醫院
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/96;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/12
• 代理公司: 北京集智東方知識產權代理有限公司 11578
• 代理人: 孫文彬

1.一種基于靶標親和性的“一體化”中藥活性成分篩選方法，其特征在于包括如下步驟：(1)將天然產物混合物備選庫樣品與靶分子接觸，(2)將未與靶分子結合的雜質截留，與靶分子親和的復合物通過，(3)將與靶分子親和的復合物解離，洗脫靶分子，獲取結合成分(群)，(4)將結合成分(群)進行定性分析。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步驟：(1)將天然產物混合物備選庫樣品與靶分子接觸，(2)使用反相功能的渦流色譜柱將未與靶分子結合的雜質截留，與靶分子親和的復合物通過，(3)將與靶分子親和的復合物解離，使用離子交換/反相混合功能的渦流色譜洗脫靶分子，獲取結合成分(群)，(4)使用液相色譜質聯用體系將結合成分(群)進行定性分析。

3.根據權利要求1-2所述的方法，其特征在于包括如下步驟：(5)靶分子的優化和進一步的生物學實驗。

4.根據權利要求1-2所述的方法，其特征在于所述天然產物混合物備選庫的制備包括如下步驟：(a)取一定量的初級原料，用乙醇溶液回流提取，合并提取液，濃縮得浸膏；對于微生物代謝產物的提取物制備，則是將含有適量微生物的培養液過濾，得到固體微生物菌絲體和培養液濾液，菌絲體再用丙酮溶液超聲破碎，過濾，濾液濃縮得浸膏，此浸膏與培養液濾液都分別作為微生物代謝產物的提取物進行下一步的處理；(b)稱取一定量步驟(a)中所得的浸膏，用雙蒸水懸浮，用有機溶劑萃取，分離有機溶劑相和水相；合并水相，備用；合并每次有機溶劑萃取物，蒸除有機溶劑，得到干膏狀有機溶劑相成分，備用；對于微生物提取物的培養液濾液部分則直接用有機溶劑萃取，合并每次有機溶劑萃取物，蒸除有機溶劑，得到干膏狀有機溶劑相成分，備用；(c)將步驟(b)中萃取后的水相部分蒸除水中溶解的少量有機溶劑，用大孔樹脂柱層析分離，用水為流動相洗脫，棄去水洗部分；用乙醇溶液洗脫，將乙醇溶液洗脫部分蒸除溶劑，得干膏狀樣品備用；(d)上述步驟(b)中制得的干膏狀有機溶劑相部分、步驟(c)中制得的干膏狀樣品為天然產物混合物備選樣品，構成一份初級原料所提供的天然產物混合物備選樣品，所有初級原料提供的天然產物混合物備選樣品即組成了本天然產物混合物備選庫。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于步驟(a)中，當初級原料為中藥處方時，除用乙醇溶液回流提取，得浸膏外，還另取初級原料，用水煎煮，煎煮液合并，濃縮得浸膏；用乙醇溶液和水提取得到的兩份浸膏，都分別作為中藥處方的提取物浸膏進行下一步的處理。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟(a)為：取一定量的初級原料，用70％-95％乙醇回流提取，合并提取液，濃縮得浸膏；對于中藥處方的提取物浸膏的制備，則按照處方中規定的藥材種類和1-6倍用量組成初級原料，分別用70％-95％乙醇按上述同樣的方法制得浸膏一；另外，同樣則按照處方中規定的藥材種類和1-6倍用量組成初級原料，用雙蒸水煎煮，煎煮液合并，濃縮得浸膏二；浸膏一和浸膏二都分別作為中藥處方的提取物浸膏進行下一步的處理；對于微生物代謝產物的提取物制備，則是將含有適量微生物的培養液過濾，得到固體微生物菌絲體和培養液濾液，菌絲體再用60％-90％丙酮超聲破碎，過濾，濾液濃縮得浸膏，此浸膏與培養液濾液都分別作為微生物代謝產物的提取物進行下一步的處理。

7.根據權利要求1-6任一項權利要求所述的方法，其中所述的天然產物混合物備選庫的初級原料選自以下中的任一種：傳統藥材或潛在的藥用動植物、按中藥處方規定的藥材種類和用量組成的混合藥材、海藻或海綿等海洋生物、微生物。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述的傳統藥材為《中藥藥典》、《中華本草》中收錄的品種；其中所述的潛在的藥用動植物為《中藥藥典》、《中華本草》中未收錄而在《中國植物志》中收錄的品種。

9.根據權利要求1-2所述的方法，其特征在于步驟(3)中的結合成分(群)是天然產物混合物備選樣品中存在的能夠與靶分子結合的包括抑制劑在內的配體分子。