[發明專利]一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法

在審

• 申請號: 201910068130.1
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN109651470A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 金永紅;郎巧潔;潘麗英
• 申請（專利權）人: 開封康諾藥業有限公司
• 主分類號: C07H19/207
• 分類號: C07H19/207;C07H1/06
• 代理公司: 鄭州德工知識產權代理事務所(普通合伙) 41163
• 代理人: 毛雁妮

本發明涉及一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，包括如下步驟：酵母細胞破壁液的制取，輔酶I粗品溶液的制取，沖洗，中空纖維素柱的過濾及切向流過濾膜包的過濾，采用中空纖維素柱和切向流過濾膜包的超濾膜過濾，降低酵母細胞破壁液中其他大分子物質的含量，提升輔酶I的純度。

技術領域

本發明屬于超濾分離純化技術領域，具體涉及一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法。

背景技術

膜分離技術是一項新型的高效分離技術，已被國際公認為是20世紀末到21世紀中期最有發展前途的一項重大高新生產技術，是利用天然或者人工合成的具有選擇透過性的薄膜，以外界能量或者化學位差為推動力，對雙組分或多組分體系進行分離、分級、提純或富集的技術。膜分離技術包括超濾、微濾、納濾和反滲透等，膜技術日趨成熟，已開始應用于醫藥領域，如臨床用于血透、血液凈化、親和過濾、腎透等，在生物制藥領域，用于抗生素和氨基酸的生產，發酵液和培養液的澄清，生物制品的滅菌與去除熱源等，以及用于中藥制劑的生產，尤其是超濾技術自20世紀90年代以來以其高效、節能和綠色等特點，在重要制劑中的應用越來越多，膜技術與常規的離心分離、沉降、過濾、萃取等方法相比，具有明顯的潛在優勢，操作方便，結構緊湊，能耗低，過程簡單，無二次污染，采用膜分離技術處理后，可有效克服無效成分量大而有效成分量低等共性缺點，將中藥制成品質精良、療效顯著的現代制劑，酵母破壁液中輔酶I和其他大分子物質較難分離，導致輔酶I中大分子物質比較多，純度不夠高，現有的輔酶I分離技術是采用超濾卷式膜分離方法，對雜質的去除率不高，專屬性不強，重現性不好且不夠準確。

發明內容

本發明的目的是為了解決背景技術中所提出的問題，而提供一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，采用中空纖維膜柱和切向流過濾膜包的超濾膜過濾，降低酵母細胞破壁液中其他大分子物質的含量，提升輔酶I的純度。

本發明的目的是這樣實現的：

一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，包括如下步驟：

S1、酵母細胞破壁液的制取：將鮮酵母經過破壁處理后得到酵母細胞破壁液。

S2、輔酶I粗品溶液的制取：將S1制得的酵母細胞破壁液經過濾、沉淀、離心后得到輔酶I粗品溶液。

S3、將中空纖維膜柱和切向流過濾膜包分別連通至超濾系統，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液分別清洗中空纖維膜柱和切向流過濾膜包，用純化水將中空纖維膜柱和切向流過濾膜包沖洗至中性。

S4、中空纖維膜柱的過濾：將S2制得的輔酶I粗品溶液置于中空纖維膜柱內進行初過濾。

S5、切向流過濾膜包的過濾：將S4過濾后的溶液置于切向流過濾膜包內進行再次過濾，過濾完成后即可將酵母細胞破壁液中的除輔酶I外的其他大分子物質分離。

進一步的，S1中，將鮮酵母加入2倍的0.5mol/L鹽酸溶液中，邊攪拌邊加入，加料完畢，加熱至55-60℃，保溫10min，降溫至15-20℃，得酵母破壁液。

進一步的，S2中，過濾時將酵母液的pH調整至等電點3.0，蛋白質分子呈等電狀態，菌體與核苷酸分離沉淀，除去蛋白質分子的水膜，則蛋白質分子互相凝聚、沉淀析出，經10000r/min高速離心機分離后，制成輔酶I粗品溶液。

進一步的，S4中，中空纖維膜柱為以聚砜、二甲基乙酰胺為原料加工成中空內腔的纖維絲，中空纖維膜柱的截留分子量為30kd。

進一步的，S5中，膜包的截留分子量為3kd。

進一步的，S4中，在過濾前，先用200±20ml/min的低流速排空中空纖維膜柱中的氣體，再調至600±20ml/min的合適流速，整個過程中中空纖維膜柱中的壓力不超過0.2Mpa。