[發明專利]一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法

在審

• 申請號: 201910068130.1
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN109651470A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 金永紅;郎巧潔;潘麗英
• 申請（專利權）人: 開封康諾藥業有限公司
• 主分類號: C07H19/207
• 分類號: C07H19/207;C07H1/06
• 代理公司: 鄭州德工知識產權代理事務所(普通合伙) 41163
• 代理人: 毛雁妮

1.一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、酵母細胞破壁液的制取：將鮮酵母經過破壁處理后得到酵母細胞破壁液

S2、輔酶I粗品溶液的制取：將S1制得的酵母細胞破壁液經過濾、沉淀、離心后得到輔酶I粗品溶液

S3、將中空纖維膜柱和切向流過濾膜包分別連通至超濾系統，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液分別清洗中空纖維膜柱和切向流過濾膜包，用純化水將中空纖維膜柱和切向流過濾膜包沖洗至中性。

S4、中空纖維膜柱的過濾：將S2制得的輔酶I粗品溶液置于中空纖維膜柱內進行初過濾。

S5、切向流過濾膜包的過濾：將S4過濾后的溶液置于切向流過濾膜包內進行再次過濾，過濾完成后即可將酵母細胞破壁液中的除輔酶I外的其他大分子物質分離。

2.根據權利要求1所述的一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，其特征在于：S1中，將鮮酵母加入2倍的0.5mol/L鹽酸溶液中，邊攪拌邊加入，加料完畢，加熱至55-60℃，保溫10min，降溫至15-20℃，得酵母破壁液。

3.根據權利要求1所述的一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，其特征在于：S2中，過濾時將酵母液的pH調整至等電點3.0，蛋白質分子呈等電狀態，菌體與核苷酸分離沉淀，除去蛋白質分子的水膜，則蛋白質分子互相凝聚、沉淀析出，經10000r/min高速離心機分離后，制成輔酶I粗品溶液。

4.根據權利要求1所述的一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，其特征在于：S4中，中空纖維膜柱為以聚砜、二甲基乙酰胺為原料加工成中空內腔的纖維絲，中空纖維膜柱的截留分子量為30kd。

5.根據權利要求1所述的一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，其特征在于：S5中，膜包的截留分子量為3kd。

6.根據權利要求1所述的一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，其特征在于：S4中，在過濾前，先用200±20ml/min的低流速排空中空纖維膜柱中的氣體，再調至600±20ml/min的合適流速，整個過程中中空纖維膜柱中的壓力不超過0.2Mpa。

7.根據權利要求1所述的一種輔酶I和其他大分子物質的分離方法，其特征在于：S5中，過濾前，先用200±20ml/min的低流速排空切向流過濾膜包內的氣體，調整流速至600±20ml/min的合適流速，整個過程中切向流過濾膜包內的壓力不超過0.2Mpa。