[發明專利]預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法及苜蓿黃酮的應用

在審

• 申請號: 201910067259.0
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN109735637A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 嚴學兵;曲根;郭玉霞;郭志鵬;管用卓;張靖雪;王苗利;劉建宇
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/04;A23K50/60;A23K50/30;A23K20/121
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 張真真

本發明涉及苜蓿黃酮的應用領域，特別是指預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法及苜蓿黃酮的應用。向豬場購買飼喂不同濃度苜蓿黃酮的斷奶仔豬結腸；收集進食不同苜蓿黃酮結腸的內容物，并提取結腸內容物中微生物的DNA；以提取結腸微生物的DNA為模板，采用細菌16S通用引物，進行熒光定量PCR檢測；分別收集熒光定量PCR產物，用氫氧化鈉溶液變性，產生單鏈DNA片段，構建Miseq文庫；根據Miseq文庫進行Miseq測序，并對Miseq測序得到的雙端序列數據進行分析。苜蓿黃酮對結腸菌群組成具有一定影響作用，且添加0.2%苜蓿黃酮對其影響效果較明顯。

技術領域

本發明涉及苜蓿黃酮的應用領域，特別是指預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法及提高苜蓿黃酮的應用價值。

背景技術

飼料中的營養物質不能直接吸收到仔豬體內，必須在消化道中消化才能將大分子有機物質分解成簡單的，可溶的，被吸收的小分子。由于消化系統發育不完善，斷奶應激而導致斷奶仔豬腸損傷引起后續腹瀉，最終的結果是采食量減少，消化能力不足，不僅仔豬的健康受到損害，而且還顯著降低了仔豬的生長性能，這是對現代化全進全出隔離斷奶飼養系統的嚴峻挑戰，也是制約養豬業發展的重要因素。由于缺乏消化酶，仔豬的腸道微生物群落尚未建全，免疫能力差，體溫調節能力差，這些決定了飼料營養需求的增加，仔豬的營養狀況在后期生長中起關鍵的影響。以下介紹哺乳仔豬消化生理特點：1）仔豬出生24 h內，由于蛋白質和血清蛋白質成分相似，仔豬可以直接吸收初乳，直接吸收到血液中而不轉化，從而使仔豬血清Y-球蛋白水平迅速提高，免疫力迅速提高。腸上皮細胞的滲透性隨著腸道的發育而變化，并在36-72小時后顯著降低；2）仔豬出生后，消化器官小、不發達，在哺乳期增長迅速，隨后增長減緩，到8-9月才接近成年水平；3）仔豬出生后，胃中只有凝乳酶，唾液酶和少量的胃蛋白酶；胃底腺發育不良，缺乏游離鹽酸，胃蛋白酶無活性，不能消化蛋白質，只有胰腺和腸腺發育較完全，胰蛋白酶，腸淀粉酶和乳糖酶活性較高，胃液分泌不足，仔豬胃和神經系統尚未建立，缺乏條件反射式的胃液分泌，隨著年齡的增長和食物的刺激胃壁，鹽酸分泌增加，使2.5-3個月齡的酸濃度接近正常豬；4）食物通過消化道的時間很短，15日齡大約1.5小時，30日齡大約3-5小時，60日齡大約16-19小時，成年大約30小時；5）成年豬的大腸中有大量的微生物，種類和數量相對固定; 出生在仔豬中的消化道是無菌的，隨著吃奶過程，微生物開始出現，并隨著生長而增加，直至形成正常的微生物群落。正常微生物抑制病原微生物的繁殖，同時刺激機體的免疫功能，減少消化系統疾病的發生。未斷奶仔豬的正常菌群未形成，易發生腸道疾病，消化吸收功能的紊亂與腸道疾病的發生均與腸道微生物區系有關。

黃酮類化合物作為一種天然抗氧化劑受到廣大學者關注，關于黃酮類化合物抗氧化作用及相關生理生化機制研究也越來越深入。苜蓿黃酮在母豬飼料中作為飼料添加劑應用，但在仔豬方面未見應用。有研究表明，苜蓿黃酮還有抗癌、抗氧化、促進脂質代謝等多種藥理作用。苜蓿黃酮在牛羊方面關于免疫、抗氧化的研究很多。但目前，苜蓿黃酮在斷奶仔豬免疫及抗氧化性能的研究能應用到仔豬飼料中未見報道。因此，本試驗目的是探討苜蓿黃酮對斷奶仔豬生長性能、養分消化率、血清免疫及抗氧化性能、肝臟抗氧化性能影響，為斷奶仔豬在免疫及抗氧化方面的分子作用機理機制及苜蓿黃酮能在養豬場中斷奶仔豬飼料方面的應用奠定理論基礎。隨著研究的深入，對苜蓿中生物活性物質研究越來越多，包括苜蓿皂苷、苜蓿黃酮、苜蓿多糖，其中苜蓿黃酮的研究很多，但是苜蓿黃酮在動物上的研究還比較少，特別是豬這一方面，而且作用機理機制在許多方面還不清楚。研究發現，苜蓿黃酮可以改變奶牛瘤胃細菌的群落結構和組成。通過體外培養法，厭氧條件下培養液中大豆異黃酮濃度為100 mg/L，對山羊瘤胃代謝影響最顯著。研究表明，苜蓿黃酮可以穩定瘤胃綿羊發酵功能，且受添加量影響。苜蓿黃酮對仔豬的生長性能的影響未見報道，苜蓿黃酮和大豆黃酮都屬于黃酮類化合物。程忠剛等研究發現，添加大豆黃酮對斷奶仔豬生長性能中的平均日增重和料肉比差異不顯著。