[發明專利]預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法及苜蓿黃酮的應用

在審

• 申請號: 201910067259.0
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN109735637A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 嚴學兵;曲根;郭玉霞;郭志鵬;管用卓;張靖雪;王苗利;劉建宇
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/04;A23K50/60;A23K50/30;A23K20/121
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 張真真

1.預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法，其特征在于，步驟如下：

（1）向豬場購買飼喂不同濃度苜蓿黃酮的斷奶仔豬結腸；

（2）收集進食不同苜蓿黃酮結腸的內容物，并提取結腸內容物中微生物的DNA；

（3）以提取結腸微生物的DNA為模板，采用細菌16S通用引物，進行熒光定量PCR檢測；

（4）分別收集熒光定量PCR產物，用氫氧化鈉溶液變性，產生單鏈DNA片段，構建Miseq文庫；

（5）根據Miseq文庫進行Miseq測序；

（6）對Miseq測序得到的雙端序列數據進行分析。

2.根據權利要求1所述的預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法，其特征在于：所述苜蓿黃酮日糧是指向基礎日糧中添加基礎日糧質量0.1-5%wt的苜蓿黃酮。

3.根據權利要求1所述的預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法，其特征在于：所述16S通用引物為338F序列如5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′所示、806R序列如5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′所示。

4. 根據權利要求1所述的預測苜蓿黃酮對斷奶仔豬結腸微生物區系影響的方法，其特征在于，所述雙端序列數據進行分析的步驟為：根據PE reads之間的overlap關系，將成對的reads拼接成一條序列，同時對reads的質量和merge的效果進行質控過濾，根據序列首尾兩端的barcode和引物序列區分樣品得到有效序列，并校正序列方向，即為優化數據；通過i-Sanger云分析平臺對優化數據進行生物信息學分析，根據序列相似度為97%的原則，將序列分為多個操作分類單元；通過云平臺進行細菌群落豐富度和多樣性分析，物種組成分析，樣本比較分析，物種差異分析及進化分析。

5.苜蓿黃酮作為斷奶仔豬日糧添加劑的應用，其用法是：向基礎日糧中加入其干物質含量0.1-5%wt的苜蓿黃酮。

6.苜蓿黃酮作為調節結腸菌群的應用，其特征在于：苜蓿黃酮作為提高梭菌屬、糞球菌屬、真細菌屬、NC2004屬、Anaerotruncus屬細菌的相對豐度和降低NK3B31屬、Alloprevotella屬、Blautia屬、擬桿菌屬相對豐度的應用。