[發(fā)明專利]一種甘油-2-α-葡萄糖基化酶在制備2-α-甘油葡萄糖苷中的應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910066879.2 | 申請日： | 2019-01-24 |
| 公開（公告）號： | CN109988799B | 公開（公告）日： | 2021-02-02 |
| 發(fā)明（設計）人： | 陳小龍;江丹;朱林江;陸躍樂;范永仙;陳翰馳 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江工業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12P19/44 | 分類號： | C12P19/44;C12P19/14;C12N15/70;C12N15/53;C12N9/24 |
| 代理公司： | 杭州天正專利事務所有限公司 33201 | 代理人： | 黃美娟;李世玉 |
| 地址： | 310014 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 甘油 葡萄糖 基化酶 制備 葡萄 糖苷 中的 應用 | ||
1.一種甘油-2-α-葡萄糖基化酶在制備2-α-甘油葡萄糖苷中的應用，其特征在于所述甘油-2-α-葡萄糖基化酶氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示。
2.如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述甘油-2-α-葡萄糖基化酶編碼基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。
3.如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述應用的方法為：將含甘油-2-α-葡萄糖基化酶基因的重組大腸桿菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液或發(fā)酵離心的濕菌體用緩沖液懸浮的菌懸液為催化劑，以甘油為底物，以蔗糖為輔助底物，在30-45℃的條件下進行反應，獲得含2-α-甘油葡萄糖苷的反應液，將反應液分離純化，獲得2-α-甘油葡萄糖苷。
4.如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于所述發(fā)酵液或菌懸液中濕菌體含量為5-100g/L，甘油的終濃度為100-150g/L，蔗糖終濃度為300-400g/L。
5.如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于反應pH為6.0-8.0，反應時間為24h。
6.如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于緩沖液為pH7.0、2.5mM磷酸緩沖液。
7.如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于所述發(fā)酵液的搖瓶制備方法：(1)將含甘油-2-α-葡萄糖基化酶基因的重組大腸桿菌接種在含50mg/L卡那霉素的種子培養(yǎng)基中，30-37℃、180-250rpm培養(yǎng)至對數(shù)生長中期，獲得種子液；所述種子培養(yǎng)基終濃度組成：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO4·12H2O 8.9g/L、KH2PO4 3.4g/L、NH4Cl 2.67g/L、Na2SO4 0.71g/L、MgSO4·7H2O 0.49g/L，溶劑為去離子水，pH6.8-7.0；
(2)發(fā)酵培養(yǎng)：將種子液以體積濃度5％的接種量接種到含卡那霉素50mg/L的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30-37℃培養(yǎng)4-6h；加入終濃度為18-22g/L的α-乳糖，在22-25℃繼續(xù)發(fā)酵12-18h，取發(fā)酵液離心，收集濕菌體細胞；所述發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量終濃度組成：酵母粉12g/L、蛋白胨15g/L、甘油10g/L、Na2HPO4·12H2O 8.9g/L、KH2PO4 3.4g/L、NH4Cl 2.67g/L、Na2SO4 0.71g/L、MgSO4·7H2O 0.3g/L，溶劑為去離子水，pH6.8-7.0。
8.如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于所述發(fā)酵液的發(fā)酵罐制備方法：
(1)將含甘油-2-α-葡萄糖基化酶基因的重組大腸桿菌接種在含50mg/L卡那霉素的種子培養(yǎng)基中，30-37℃、180-250rpm培養(yǎng)至對數(shù)生長中期，獲得種子液；所述種子培養(yǎng)基終濃度組成：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO4·12H2O 8.9g/L、KH2PO4 3.4g/L、NH4Cl 2.67g/L、Na2SO4 0.71g/L、MgSO4·7H2O 0.49g/L，溶劑為去離子水，pH6.8-7.0；
(2)發(fā)酵培養(yǎng)：將新鮮培養(yǎng)的種子液按照體積濃度5％的接種量，接種到含質(zhì)量濃度0.05％消泡劑和50mg/L卡那霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)4h；加入終濃度為20g/L的α-乳糖，在發(fā)酵溫度25℃、溶解氧DO大于20％、pH6.8條件下發(fā)酵培養(yǎng)，獲得發(fā)酵液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量終濃度組成：酵母粉12g/L、蛋白胨15g/L、甘油10g/L、Na2HPO4·12H2O 8.9g/L、KH2PO4 3.4g/L、NH4Cl 2.67g/L、Na2SO4 0.71g/L、MgSO4·7H2O 0.3g/L，溶劑為去離子水，pH6.8-7.0。
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