[發明專利]一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法在審
| 申請號： | 201910064509.5 | 申請日： | 2019-01-23 |
| 公開（公告）號： | CN109912711A | 公開（公告）日： | 2019-06-21 |
| 發明（設計）人： | 吳小平 | 申請（專利權）人： | 北京測爾康生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765 |
| 代理公司： | 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411 | 代理人： | 張清彥 |
| 地址： | 102200 北京市昌平區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 完全抗原 黃芩苷 黃酮類 小分子 取上清液 透析 制備 多克隆抗體制備 二甲基甲酰胺 單克隆抗體 復合碳酸鹽 緩沖溶液 免疫試驗 透析液體 鹽緩沖液 離心管 透析袋 亞酰胺 磷酸 分裝 碳二 無水 裝入 離子 中藥材 溶解 合成 篩選 保存 | ||
1.一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法，其特征在于包括下述步驟：
(1)取黃酮類小分子黃芩苷40-50mg，溶解于1000μL無水N，N-二甲基甲酰胺中；
(2)依次加入10-15mg碳二亞酰胺和15-25mgEDC-HCl，室溫下反應15-20h，離心3-8min，取上清液待用；
(3)取上清液加入7-10ml復合碳酸鹽緩沖溶液，每次加入25μl，直到加完為止，室溫下攪拌3-5h；
(4)將反應液裝入透析袋，用pH值為7-8、離子濃度為0.01-0.03mol/L磷酸性鹽緩沖液透析一周，每天換透析液體2次，透析完畢，分裝于離心管后，-20℃保存。
2.根據權利要求1所述的一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法，其特征在于：所述復合碳酸鹽緩沖溶液的pH值為9-10、離子濃度為0.03-0.08mol/L、含載體蛋白為200-300mg/ml。
3.根據權利要求2所述的一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法，其特征在于：所述載體蛋白為牛血清白蛋白n。
4.根據權利要求3所述的一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法，其特征在于：所述牛血清白蛋白n是由下述制備方法制成：將牛血清白蛋白900-950mg，溶解于10000uL去離子水中，依次再加入40-45mg碳二亞酰胺和55-65mgEDC-HCL，室溫下反應2小時，取10％乙二胺溶液100uL，緩慢滴加于上述牛血清白蛋白溶液中，用碳酸鈉調節PH值到9-11，4℃反應10-20小時；將反應液裝入透析袋，用pH值為7-8、離子濃度為0.01-0.03mol/L磷酸鹽緩沖液透析一周，每天換透析液體3次，透析完畢，分裝玻璃瓶，-20℃保存待用。
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