[發(fā)明專利]一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910064509.5
• 申請日: 2019-01-23
• 公開（公告）號: CN109912711A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發(fā)明（設計）人: 吳小平
• 申請（專利權(quán)）人: 北京測爾康生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 張清彥

本發(fā)明公開一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法，包括下述步驟：取黃酮類小分子黃芩苷，溶解于1000μL無水N，N?二甲基甲酰胺中，依次加入碳二亞酰胺和EDC?HCl，室溫下反應，離心，取上清液待用；取上清液加入復合碳酸鹽緩沖溶液，室溫下攪拌；將反應液裝入透析袋，用pH值為7?8、離子濃度為0.01?0.03mol/L磷酸性鹽緩沖液透析一周，每天換透析液體2次，透析完畢，分裝于離心管后，?20℃保存。本發(fā)明為中藥材提供一種完全抗原合成解決方案，方便獲得完全抗原后，進行下一步動物進行免疫試驗，能夠獲得關于黃芩苷單克隆抗體或多克隆抗體制備或篩選提供核心解決方案。

技術領域

本發(fā)明涉及中藥成分檢測技術領域，具體涉及一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原制備方法。

背景技術

本發(fā)明技術方案與奶粉中三聚氰胺小分子半抗原與抗原合成方法與應用有相近之處；現(xiàn)有技術對中藥材成分分析周期比較長，檢測樣本費用較高，目前市場依靠傳統(tǒng)的液相色譜儀器檢測方法。為了建立一種快速檢測中藥中黃芩苷方法，為中藥材提供一種完全抗原合成解決方案以及為了產(chǎn)品應用提供思路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原制備方法，解決現(xiàn)有的黃芩芏成分分析周期長、檢測樣本費用高的問題。

為解決上述技術問題，本發(fā)明的技術方案是這樣實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供一種黃酮類小分子黃芩苷完全抗原的制備方法，包括下述步驟：

(1)取黃酮類小分子黃芩苷40-50mg，溶解于1000μL無水N，N-二甲基甲酰胺中；

(2)依次加入10-15mg碳二亞酰胺和15-25mgEDC-HCl，室溫下反應 15-20h，離心3-8min，取上清液待用；

(3)取上清液加入7-10ml復合碳酸鹽緩沖溶液，每次加入25μl，直到加完為止，室溫下攪拌3-5h；

(4)將反應液裝入透析袋，用pH值為7-8、離子濃度為0.01-0.03mol/L磷酸性鹽緩沖液透析一周，每天換透析液體2次，透析完畢，分裝于離心管后，-20℃保存。

其中，優(yōu)選地，所述復合碳酸鹽緩沖溶液的pH值為9-10、離子濃度為 0.03-0.08mol/L、含載體蛋白為200-300mg/ml。

其中，優(yōu)選地，所述載體蛋白為牛血清白蛋白n。

其中，優(yōu)選地，所述牛血清白蛋白n是由下述制備方法制成：將牛血清白蛋白900-950mg，溶解于10000uL去離子水中，依次再加入40-45mg碳二亞酰胺和55-65mgEDC-HCL，室溫下反應2小時，取10％乙二胺溶液100uL，緩慢滴加于上述牛血清白蛋白溶液中，用碳酸鈉調(diào)節(jié)PH值到9-11，4℃反應10-20 小時；將反應液裝入透析袋，用pH值為7-8、離子濃度為0.01-0.03mol/L磷酸鹽緩沖液透析一周，每天換透析液體3次，透析完畢，分裝玻璃瓶，-20℃保存待用。

本發(fā)明的設計實驗圖如圖2所示；

實驗圖說明圖如圖3如示。

圖中：

A：黃芩苷

B：NHS

C：EDC-HCL

D：BSAn(牛血清白蛋白n)

E：黃芩苷-BSA完全抗原

本發(fā)明方法主要是為了建立一種快速檢測中藥中黃芩苷完全抗制備方法，為中藥材提供一種完全抗原合成解決方案，方便獲得完全抗原后，進行下一步動物進行免疫試驗，能夠獲得關于黃芩苷單克隆抗體或多克隆抗體制備或篩選提供核心解決方案，為產(chǎn)品應用提供思路。

本發(fā)明的有益效果：