[發明專利]核型分析制備高分辨染色體分散液

有效

• 申請號: 201910061346.5
• 申請日: 2019-01-23
• 公開（公告）號: CN109540644B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 李存璽;劉恒濤;劉舒;李能干
• 申請（專利權）人: 北京仁基源醫學研究院有限公司;李存璽;劉恒濤
• 主分類號: G01N1/38
• 分類號: G01N1/38
• 代理公司: 北京中知法苑知識產權代理有限公司 11226
• 代理人: 常玉明;張蘭海

1.核型分析制備高分辨染色體分散液，其特征在于：由以下組分組成：

Tris-HCL 0.05～1mmol/L，pH為7.5～10.0；KCl 2～8g/L，溶劑為三蒸水。

2.根據權利要求1所述的核型分析制備高分辨染色體分散液，其特征在于：Tris-HCL0.5mmol/L，pH為8.0；KCl 4g/L，溶劑為三蒸水。

3.權利要求1所述的核型分析制備高分辨染色體分散液的制備方法，其特征在于：由下述原料配比制備而成：

A、稱量配比的原料：KCl 2-8g；

B、將以上原料溶解至1000ml三蒸水中，充分溶解；

C、加入0.05～1mmol/L Tris-HCL，混勻；

D、4℃保存。

4.根據權利要求3所述的核型分析制備高分辨染色體分散液的制備方法，其特征在于：

A、稱量配比的原料：KCl 4g；

B、將以上原料溶解至1000ml三蒸水中，充分溶解；

C、加入0.5mmol/L Tris-HCL，混勻；

D、4℃保存。

5.應用權利要求1所述的核型分析制備高分辨染色體分散液制備染色體的方法，包括如下步驟：

步驟1：淋巴細胞接種培養：將人體外周血0.3ml-0.45ml在接種架上接種到培養管中，置37℃培養66-72小時，收獲前分別加入HD550、秋水仙素，混勻；繼續培養至收獲；

步驟2：淋巴細胞收獲：

2.1.收獲時，將培養管放入離心機內，離心1100rpm，10min；棄去上清液；

2.2.分散染色體：彈打混勻細胞，加入預熱到37℃的分散液5-10ml，彈打混勻細胞，37℃處理10-20分鐘，離心1100rpm，10min；

步驟3：制備細胞懸液

3.1.預固定：立即沿管壁迅速加入預熱到37℃的1ml固定液，混勻；

3.2.離心1100rpm，10min；去上清液，加入10ml固定液，混勻細胞，于37℃固定15min；

3.3.離心1100rpm，10min；去上清液，加入9ml固定液，混勻細胞；

3.4.離心1100rpm，10min；去上清液，重新加入新鮮固定液，彈打混勻細胞，按細胞計數留適量固定液，即每600μl固定液8萬細胞，制成細胞懸液；

步驟4：制片

4.1.滴片時，吸取細胞懸液，滴加在載玻片上，過酒精燈火焰2次后，顯微鏡下觀察滴片效果，制得染色體標本；

4.2.將制好的玻片放入烤箱內烘烤；

步驟5：G帶染色：將烘烤后冷卻的樣本玻片，經胰酶消化，染色，分析染色體核型。

6.根據權利要求5所述的核型分析制備高分辨染色體分散液制備染色體的方法，其特征在于：所述的分散液成分為：Tris-HCL 0.5mmol/L，pH為8.0；KCl 4g/L，溶劑為三蒸水。

7.根據權利要求5所述的核型分析制備高分辨染色體分散液制備染色體的方法，其特征在于：

步驟2：淋巴細胞收獲：

2.1.收獲時，將培養管放入離心機內，離心1100rpm，10min；棄去上清液；

2.2.分散染色體：彈打混勻細胞，加入預熱到37℃的分散液5-10ml，彈打混勻細胞，37℃處理20分鐘，離心1100rpm，10min。