[發明專利]鑒別獼猴桃品種的DNA條帶及基于其的快速鑒定方法

有效

• 申請號: 201910058830.2
• 申請日: 2019-01-22
• 公開（公告）號: CN109929944B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 解巧利;嚴飛;王云鵬;朱永生;賴江華;魏曙光;張洪波;張寶
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 徐文權

本發明公開了鑒別獼猴桃品種的DNA條帶及基于其的快速鑒定方法，可以采用分子鑒定法，或者形態與分子鑒定相結合的鑒定方法。形態鑒定是通過對待測獼猴桃的大小，首尾形態，表皮毛以及橫縱切面形態進行鑒定；分子鑒定是以待檢測的獼猴桃DNA為模板，對獼猴桃的DNA條形碼進行聚合酶鏈式反應擴增，對擴增獲得的產物進行電泳檢測，電泳結果中存在與所述DNA條形碼對應的DNA條帶，進一步對擴增產物進行測序，對擴增產物序列進行比對分析，通過DNA條形碼的堿基序列差異進行鑒定。本發明可以快速準確區分十二種市售獼猴桃，解決了現有獼猴桃市場中以次充好的食品質量及安全的鑒定需要。

技術領域

本發明屬于分子鑒定技術領域，涉及鑒別獼猴桃品種的DNA條帶及基于其的快速鑒定方法。

背景技術

獼猴桃被稱為水果之王和維生素C之冠，具有較高的經濟效益，國內的主要種植區有四川、陜西和貴州等地。對于獼猴桃品種的檢測、防控，是提高其經濟價值，促進地區獼猴桃行業經濟發展的必要手段。目前市場上的獼猴桃價格與品種的品質和口感直接相關。由于普通消費者對獼猴桃的分類知之甚少，市場上常出現不法商販“以次充好”欺詐消費者的現象，對獼猴桃食品質量安全和消費者權益造成損害，出現相關民事糾紛。因此，亟需能夠快速準確鑒定獼猴桃品種的方法，為科學解決此類司法糾紛和法律審判提供有效證據。

DNA條形碼是一種分子鑒定新技術，該技術能夠利用標準的、具有足夠變異、易擴增且相對較短的DNA片段實現物種鑒定。該技術可用于發現新種和保護生物多樣性，可有效監控珍稀瀕危物種進、出口貿易，可實現有害生物及入侵種的快速查驗，對我國生物資源保護具有重大意義。DNA條形碼的概念2003年由加拿大分類學家PaμL Hebert首次提出后就在世界范圍內受到了廣泛關注。2005年前后，DNA條形碼被引入植物研究中。2009年，國際生命條形碼聯盟植物工作組(CBOL Plant Working Group)初步推薦使用葉綠體基因rbcL和matK片段。我國學者陳士林等對DNA條形碼在藥用植物中的研究進行了詳細的論述，并建議建立以ITS2為核心以trnH-psbA為輔的植物類藥材DNA條形碼鑒定體系。Laura Jaakola等利用DNA條形碼技術結合高分辨率溶解曲線成功的鑒別了藍莓品種Northcountry和Northblue，為以DNA條形碼鑒別獼猴桃品種的不同資源的可行性提供了參考。線粒體COI基因的序列作為DNA條形碼在大部分動物中十分有效。在植物分類學研究中，DNA條形碼的進展相對緩慢，目前尚處于對所提議的葉綠體DNA片段rpoB、rpoC1、matK和rbcL等進行有效性比較和評價的階段。DNA條形碼是傳統物種鑒定的補充。

中國專利CN107326081A公布了東北地區軟棗獼猴桃，狗棗獼猴桃和葛棗獼猴桃的鑒定方法。但對其他品種的鑒定尚未發現快速準確的分子鑒定手段。

發明內容

為了克服上述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種鑒別獼猴桃品種的DNA條帶及基于其的快速鑒定方法。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明公開了用于鑒別獼猴桃品種的DNA條帶，所述DNA條帶的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1或SEQ.ID.NO.2所示。

優選地，核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示的DNA條帶能夠區分紅陽、黃金果、川黃金這三種品種與海沃德、徐香、金艷、華優、秦美、翠玉、翠香、亞特和鳳仙樓其他九種品種。

進一步優選地，若擴增產物115bp，132bp和310bp為C且206bp和215bp為G則為黃金果、川黃金和紅陽中的一種；若115bp，132bp和310bp為T且206bp和215bp為A，則為其他九個市售品種。

優選地，核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示的DNA條帶能夠區分金艷與紅陽、黃金果、川黃金、海沃德、徐香、華優、秦美、翠玉、翠香、亞特和鳳仙樓；