[發(fā)明專利]用于肺癌檢測的DNA甲基化qPCR試劑盒及使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910054201.2
• 申請日: 2019-01-21
• 公開（公告）號: CN109504780B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓艷;霍華德;萬季;王志強(qiáng);余濤;張超;張劍;宋麒
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市新合生物醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京冠和權(quán)律師事務(wù)所 11399
• 代理人: 朱健;陳國軍

1.一種用于肺癌檢測的DNA甲基化qPCR試劑盒，其特征在于：所述試劑盒通過檢測或測量受試樣品DNA中一種或多種特定基因的甲基化狀態(tài)或水平來篩查和診斷肺癌，所述試劑盒中包含下述組成部分：

（1）用于檢測SHOX2基因甲基化狀態(tài)的特異性引物SEQ ID NO：1-2和探針SEQ ID NO：3；

（2）用于檢測HOXA9基因甲基化狀態(tài)的特異性引物SEQ ID NO：4-5和探針SEQ ID NO：6；

（3）用于檢測TAC1基因甲基化狀態(tài)的特異性引物SEQ ID NO：7-8和探針SEQ ID NO：9；

（4）用于檢測ACTB基因甲基化狀態(tài)的特異性引物SEQ ID NO：10-11和探針SEQ ID NO：12。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述特異性引物SEQ ID NO：1、2、4、5、7、8、10、11均經(jīng)過硫代磷酸酯修飾，且在嚴(yán)格條件下與甲基化或非甲基化的目標(biāo)基因區(qū)域雜交。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述探針SEQ ID NO：3、6、9、12是基于TaqManTM設(shè)計的，且在嚴(yán)格條件下與甲基化或非甲基化的目標(biāo)基因區(qū)域雜交。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述特異性引物SEQ ID NO：1、2、4、5、7、8、10、11和所述探針SEQ ID NO：3、6、9、12的長度為10-50nt。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包含下述組成部分：

（5）PCR反應(yīng)緩沖液；

（6）DNA聚合酶。

6.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包含下述組成部分：

（7）血漿游離DNA提取試劑；

（8）血漿游離DNA甲基化轉(zhuǎn)化試劑。

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其中所述血漿游離DNA甲基化轉(zhuǎn)化試劑為亞硫酸氫鹽。

8.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述受試樣品DNA為完整基因組、無細(xì)胞DNA或循環(huán)腫瘤DNA。

9.如權(quán)利要求1-8任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒所檢測的特定基因的檢測靶點(diǎn)序列和檢測靶點(diǎn)位置如下：

（1）SHOX2基因：檢測靶點(diǎn)序列如SEQ ID NO：13所示，檢測靶點(diǎn)位置為Chr3： 158，096，011-158，106，163；

（2）HOXA9基因：檢測靶點(diǎn)序列如SEQ ID NO：14所示，檢測靶點(diǎn)位置為Chr7：27，162，435-27，165，530；

（3）TAC1基因：檢測靶點(diǎn)序列如SEQ ID NO：15所示，檢測靶點(diǎn)位置為Chr7： 97，731，959-97，740，472；

（4）ACTB基因：檢測靶點(diǎn)序列如SEQ ID NO：16所示，檢測靶點(diǎn)位置為Chr7：5，532，001-5，532，300。