[發(fā)明專(zhuān)利]一種海洋真菌來(lái)源azaphilones類(lèi)化合物及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910049570.2
• 申請(qǐng)日: 2019-01-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109706086B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹飛;朱華結(jié);劉云鳳;李龍飛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河北大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/14
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/14;C12P17/06;C07D311/76;A01N43/16;A01P3/00;C12R1/645
• 代理公司: 石家莊國(guó)域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司 13112
• 代理人: 蘇艷肅

1.一種海洋真菌，其特征是，所述海洋真菌為格孢菌（Pleosporalessp.）HBU-135菌株，保藏日期為2018年10月18日，保藏編號(hào)為CGMCC No.16379，保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏單位地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。

2.一種海洋真菌來(lái)源azaphilones類(lèi)化合物的制備方法，其特征是，所述化合物的結(jié)構(gòu)式為

或；

該化合物的制備方法包括如下步驟：

（1）將權(quán)利要求1所述的格孢菌（Pleosporalessp.）HBU-135菌株接種于菌種培養(yǎng)基中進(jìn)行菌種培養(yǎng)；

（2）菌種培養(yǎng)完成后，將其接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，得到發(fā)酵物；

（3）用乙酸乙酯對(duì)發(fā)酵物進(jìn)行萃取2–4次，合并乙酸乙酯萃取液后減壓濃縮得到粗浸膏；

（4）對(duì)所得粗浸膏進(jìn)行色譜分離即得所述azaphilones類(lèi)化合物，所述的色譜分離為依次進(jìn)行正相硅膠柱色譜分離、反相硅膠柱色譜分離、凝膠柱色譜分離和高效液相色譜分離。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海洋真菌來(lái)源azaphilones類(lèi)化合物的制備方法，其特征是，步驟（1）中，所述菌種培養(yǎng)基為：葡萄糖1.0–10wt%、酵母膏0.1–4.0wt%、蛋白胨0.2–4.0wt%、瓊脂1.0–6.0wt%、粗海鹽3.0–10wt%，其余為水；菌種培養(yǎng)溫度為15–35℃，培養(yǎng)時(shí)間為3–10天。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海洋真菌來(lái)源azaphilones類(lèi)化合物的制備方法，其特征是，步驟（2）中，每單位份的所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：馬鈴薯40–120 g、葡萄糖10–30 g、MgCl₂ 5–20 g、水200–600 mL；發(fā)酵培養(yǎng)條件為在15–35℃下靜置培養(yǎng)20–50天。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海洋真菌來(lái)源azaphilones類(lèi)化合物的制備方法，其特征是，步驟（4）中：

所述正相硅膠柱色譜分離為：先采用固定相為100~200目硅膠，流動(dòng)相為1.5–3vol%甲醇/二氯甲烷混合溶液進(jìn)行洗脫，洗脫體積為3?5個(gè)柱體積，將所得洗脫液濃縮后再采用固定相為200~300目硅膠，流動(dòng)相為25–30vol%乙酸乙酯/石油醚混合溶液進(jìn)行洗脫，洗脫體積為2?3個(gè)柱體積；

所述反相硅膠柱色譜分離采用的固定相為C₁₈硅膠，流動(dòng)相為60–70vol%甲醇/水混合溶液，洗脫體積為2?3個(gè)柱體積；

所述凝膠柱色譜分離的固定相為sephadex LH-20，流動(dòng)相為甲醇，洗脫體積為3?5個(gè)柱體積；

所述高效液相色譜分離中采用的色譜柱為半制備C₁₈色譜柱，XBridge OBD，5μm，10 ×250 mm，流動(dòng)相為60–65vol%的甲醇/水混合溶液。

6.一種權(quán)利要求2~5任一項(xiàng)所述方法所制備的海洋真菌來(lái)源azaphilones類(lèi)化合物在制備抗農(nóng)業(yè)致病真菌藥物中的應(yīng)用；所述農(nóng)業(yè)致病真菌指甘藍(lán)黑斑病菌（Alternaria brassicicola）、蘋(píng)果輪紋病菌（Botryosphaeria dothidea）和棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum）。