[發明專利]雙受體時間分辨時間分辨熒光共振能量轉移法

在審

• 申請號: 201910048682.6
• 申請日: 2013-02-06
• 公開（公告）號: CN110044855A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: P.羅比;B.伯恩德;S.達漢
• 申請（專利權）人: 珀金埃爾默生物信號股份有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 余曉文

1.獨立地確定樣品中是否存在兩種分析物的方法，其包括：

使所述樣品接觸第一分析物特異性的結合配偶體和第二分析物特異性的結合配偶體，其中所述的第一和第二分析物特異性的結合配偶體分別和鑭系元素螯合物部分偶聯；

使所述樣品暴露于能夠激發所述的第一和第二分析物特異性的結合配偶體中螯合物的鑭系元素的波長范圍內的光下；和

獨立地確定是否所述第一分析物特異性的結合配偶體和所述第二分析物特異性的結合配偶體分別結合所述第一分析物和所述第二分析物，從而獨立地確定所述樣品中是否存在所述兩種分析物。

2.確定酶對兩種不同的底物是否具有活性的方法，其包括：

提供包含兩種不同底物的樣品；

在足以從所述第一底物產生第一分析物并且從所述第二底物產生第二分析物的條件下，使所述樣品和酶接觸；

使所述樣品接觸第一分析物特異性的結合配偶體和第二分析物特異性的結合配偶體，其中所述第一和第二分析物特異性的結合配偶體分別和鑭系元素螯合物部分偶聯；

使所述樣品暴露于能夠激發所述第一和第二分析物特有的結合部分中螯合物的鑭系元素的波長范圍內的光；以及

獨立地確定所述第一分析物特異性的結合配偶體和所述第二分析物特異性的結合配偶體是否分別結合所述第一分析物和所述第二分析物，由此確定所述酶是否對所述第一底物和所述第二底物具有活性。

3.確定兩種酶是否獨立地對底物具有活性的方法，其包括：

提供包含底物的樣品；

在足以用第一酶產生第一分析物并且用第二酶產生第二分析物的條件下使所述樣品和兩種不同的酶接觸；

使所述樣品接觸第一分析物特異性的結合配偶體和第二分析物特異性的結合配偶體，其中所述第一和第二分析物特異性的結合配偶體分別和鑭系元素螯合物部分偶聯；

使所述樣品暴露于能夠激發所述的第一和第二分析物特異性的結合配偶體的螯合物中的鑭系元素的波長范圍內的光；以及

分別獨立地確定是否所述第一分析物特異性的結合配偶體和所述第二分析物特異性的結合配偶體結合所述第一分析物和所述第二分析物，從而獨立地確定所述第一酶和所述第二酶對所述底物的活性。

4.獨立地確定樣品中是否存在兩種分析物的方法，其包括：

使所述樣品接觸結合有第一熒光能量共振轉移(FRET)受體的第一分析物特異性的結合配偶體、結合有第二FRET受體的第二分析物特異性的結合配偶體和具有鑭系元素螯合物部分的化合物；

使所述樣品暴露于能夠激發所述的第一和第二分析物特異性的結合配偶體的螯合物中的鑭系元素的波長范圍內的光；以及

分別獨立地確定是否所述第一分析物特異性的結合配偶體和所述第二分析物特異性的結合配偶體結合所述第一分析物和所述第二分析物，從而獨立地確定所述樣品中是否存在所述兩種分析物。

5.確定兩種酶是否獨立地對底物具有活性的方法，其包括：

提供包含底物的樣品，其中所述底物標記有親和標記物；

在足以用第一酶產生第一分析物并且用第二酶產生第二分析物的條件下使所述樣品和兩種不同的酶接觸；

使所述樣品具有鑭系元素螯合物部分的親和標記物特異性的結合配偶體接觸；

使所述樣品接觸第一分析物特異性的結合配偶體和第二分析物特異性的結合配偶體，其中所述第一和第二分析物特異性的結合配偶體分別偶聯于檢測部分，其中之一是能夠被波長為約600～635nm的光所激發，而另一檢測部分能夠被波長為約675～725的光所激發；

使所述樣品暴露于能夠激發所述螯合物中鑭系元素的波長范圍內的光；以及

分別獨立地確定是否所述第一分析物特異性的結合配偶體和所述第二分析物特異性的結合配偶體結合所述第一分析物和所述第二分析物，從而獨立地確定所述第一酶和所述第二酶對所述底物的活性。

6.權利要求1～3所述的方法，其中在所述兩個螯合物部分中的鑭系元素是相同的。

7.權利要求1～3所述的方法，其中所述偶聯后的螯合物部分在兩個結合配偶體中是相同的。