[發明專利]一種青島百合花器官組織總RNA提取方法

在審

• 申請號: 201910046719.1
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109666670A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 李偉;于佳玉;王奎玲;劉慶華
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 趙永偉;李魏英

本發明提供一種青島百合花器官組織總RNA提取方法，在利用trizol試劑粗提取的基礎上，依次去除蛋白質、多糖和無機鹽離子，先用異丙醇選擇性沉淀RNA，然后利用醋酸鉀和無水乙醇沉淀RNA，運用兩種試劑對RNA進行沉淀，能有效地去除青島百合花器官組織中的多糖和次生代謝物，RNA分離效率高。本發明提供的方法適用于從富含多糖及其他次生代謝物質的百合花器官組織中提取RNA，具有所用試劑簡單、提取時間短、經濟快速、穩定性好，提取的核酸質量高的有益效果。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，尤其是一種青島百合花器官組織總RNA提取方法。

背景技術

西北農林科技大學的郝福玲等2005年“百合花瓣總RNA提取方法的研究”——改進CTAB-LiCl法能有效去除亞洲百合‘Pollyanna’和東方百合‘Sorbonne’中的多糖；南京林業大學的吳小萍等2006年的“百合總RNA提取方法的比較和分析”——采用卷丹、麝香百合‘富田’和離體鮮切花的花蕾為材料，比較Trizol法、異硫氰酸胍法、CTAB改進法和SDS改進法提取總RNA的效果，發現SDS改進法從百合不同組織中提取質量好、產率高、完整性強的RNA；中國農業大學尹慧等2008年“百合葉片總RNA提取方法比較及優化”——以鐵炮百合‘白天堂’組培苗葉片為材料，比較了改進CTAB法、改進SDS法及傳統Trizol法、CTAB法、SDS法提取RNA的效果，采用傳統CTAB法，利用醋酸鈉及無水乙醇去除多糖，酚/氯仿反復抽提去除蛋白，DNase Ⅰ去除DNA，LiCl沉淀RNA。RT-PCR表明該方法提取的總RNA可直接用于分子克隆和基因表達分析等分子生物學實驗；沈陽農業大學的張君堂等2009年“Trizol-A+試劑法提取百合總RNA”——0.8ml Trizol-A+試劑比較適合東方百合‘Sorbonne’的RNA提取；云南農業大學的和鳳美等2009年“一種新鐵炮百合花瓣總RNA的提取方法”——以新鐵炮百合花瓣為材料，采用非異硫氰酸胍提取法、一步快速熱酚抽提法、Trizol試劑法、RNA抽提試劑盒法(天為時代)、Trizol試劑法與RNA抽提試劑盒法(天為時代)相結合提取花瓣總RNA。結果表明：Trizol試劑法與RNA抽提試劑盒法(天為時代)相結合的方法能有效地抑制酚類物質、多糖等次生代謝產物對RNA的影響，可從新鐵炮百合花瓣中獲得質量高、完整性好的總RNA；北京林業大學的杜運鵬等2010年“百合鱗片總RNA提取方法的比較”——以東方百合品種‘Siberia’的鱗片為材料，比較了Trizol法、改良Trizol法、RNA提取試劑盒以及改良CTAB法提取RNA的效果，改良CTAB法能有效去除多糖，兩個樣品的RNA平均得率分別為103.57μg/g和119.21μg/g；昆明理工大學的劉迪秋等2012年“一種從百合組織中同時提取RNA和DNA的方法”——利用異硫氰酸胍法得到總核酸溶液的基礎上，兩次利用高濃度醋酸鉀沉淀多糖，有效地去除百合樣品中的多糖，然后用氯化鋰和無水乙醇協同作用選擇性沉淀RNA，最后利用醋酸鈉和異丙醇沉淀DNA；北京林業大學的劉曉華等2012年“一種有效的百合花芽RNA的提取方法”——以東方百合品種‘Sorbone’的花芽為材料，比較了改良CTAB法、Trizol法、RNA提取試劑盒(百泰克)，改良RNA提取試劑盒提取花芽總RNA。結果表明改良RNA提取試劑盒能有效地抑制酚類物質、多糖等次生代謝產物對RNA的影響，可從東方百合花芽中獲得質量高、完整性好的總RNA；山西農業大學發張鮮艷等2013年“山丹百合花蕾總RNA提取方法的比較”：以SDS改進法、CTAB改進法及EASYAPIN試劑盒法3種方法提取山丹百合花蕾的總RNA，并通過紫外分光光度法和凝膠電泳檢測對其提取效果進行分析比較。發現EASYAPIN試劑盒法提取的RNA質量好，純度高，完整性強，可直接進行下一步的分子生物學研究；北京農學院的王杰等2015年“不同植物組織RNA提取方法的比較分析”——以蠟質的紅掌葉片、含糖較多的百合花瓣和含色素較多的萬壽菊花瓣為材料，使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取試劑盒法等進行RNA的提取，發現Trizol法能夠提取百合花瓣總RNA；山西農業大學發樊俊苗等2017年“一種百合總RNA提取方法”——在傳統法的基礎上，使用氯仿對樣品提純去雜3次，并使用75％的乙醇對RNA沉淀洗滌2次能更好地去除樣品RNA中的雜質，適用于百合各個器官、各個品種RNA提取。