[發明專利]一種青島百合花器官組織總RNA提取方法

在審

• 申請號: 201910046719.1
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109666670A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 李偉;于佳玉;王奎玲;劉慶華
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 趙永偉;李魏英

1.一種青島百合花器官組織總RNA提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

A.將-80℃保存的青島百合花瓣取0.1-0.3g置于液氮中，加入PVP，研磨成細粉，迅速轉入液氮預冷的1.5ml離心管中，加trizol裂解液1ml，渦旋2-3min，室溫下靜置6-8min；

B.于4℃下12000rpm離心15min，取上清液約800μl至1.5ml新的RNase-Free的離心管，吸頭避免接觸管底的沉淀；

C.在上清中加入上清體積1/5的苯酚、氯仿、異戊醇混合液，室溫靜置10min后，劇烈震蕩，4℃下，12000rpm離心5min；

D.取步驟C的上清液，加入清夜體積1/2的異丙醇，室溫靜置10min后，顛倒混勻，4℃下12000rpm離心2min，棄上清，保留底部沉淀；

E.用0.5ml KCl溶液溶解步驟D所得的沉淀，加入等體積的氯仿與異戊醇的混合液，震蕩混勻，4℃下12000rpm離心10min，重復抽提1次；

F.取步驟E的上清，沿著管壁緩慢向上清液中加入上清液體積2倍的無水乙醇，上清液體積1/3的KAc，-20℃放置1h，4℃下12000rpm離心10min；

G.在沉淀中加入等體積的75％乙醇，顛倒混勻，充分洗滌，5000rpm離心1min；

H.去上清，再次加入等體積的75％乙醇，顛倒混勻，充分洗滌，5000rpm離心1min，自然干燥；

I.將干燥的沉淀加入不少于30μL的RNA-free ddH2O溶解，得到RNA溶液，置于--80℃冰箱保存。

2.根據權利要求1所述的一種青島百合花器官組織總RNA提取方法，其特征在于，苯酚：氯仿：異戊醇體積比為25:24:1，混合液的pH值為4.5。

3.根據權利要求2所述的一種青島百合花器官組織總RNA提取方法，其特征在于，氯仿：異戊醇體積比為24:1。

4.根據權利要求3所述一種青島百合花器官組織總RNA提取方法，其特征在于，所述KCl溶液濃度為0.2mol/L。

5.根據權利要求4所述的一種青島百合花器官組織總RNA提取方法，其特征在于，所述KAc溶液濃度為3mol/L，pH值為5.2。

6.根據權利要求1-5任意一項所述的一種青島百合花器官組織總RNA提取方法，其特征在于，所述PVP為聚乙烯比咯烷酮PVP30。