[發明專利]微流控芯片納米信號增強結構加工方法

在審

• 申請號: 201910046479.5
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109647555A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 楊文婷;曹臻;陳亮
• 申請（專利權）人: 江蘇醫聯生物科技有限公司
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00
• 代理公司: 北京文苑專利代理有限公司 11516
• 代理人: 朱青

本發明涉及一種微流控芯片納米信號增強結構加工方法，包括：步驟一：利用傾斜角沉積的方法在固相載體玻璃片上制備集成金屬納米結構，所述金屬納米結構為金納米結構或銀納米結構；步驟二：在集成有金屬納米結構的玻璃片表面加入DSP溶液，在室溫下反應，得到金屬納米結構表面鍵合有DSP的集成金屬納米結構玻璃載體。本發明提供的微流控芯片納米信號增強結構加工方法，加工工藝簡單，通過在固相載體的指定區域蒸鍍金屬納米結構，通過局部表面等離子體共振效應實現熒光增強，大大提高了蛋白質芯片的熒光檢測靈敏度，對疾病的早期檢測與診斷具有重要參考價值，可以很好地滿足實際應用的需要。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種微流控芯片納米信號增強結構加工方法。

背景技術

微流控芯片技術是把生物、化學、醫學分析過程的樣品制備、反應、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動完成分析全過程的技術。由于它在生物、化學、醫學等領域的巨大潛力，已經發展成為一個生物、化學、醫學、流體、電子、材料、機械等學科交叉的嶄新研究領域。蛋白質芯片是微流量為零的點陣列型雜交芯片，屬于微流控芯片(micro-chip)的特殊類型。傳統蛋白質芯片一般是對固相載體整體進行特殊的化學處理，再將已知的蛋白分子固定其上捕獲能與之特異性結合的待測蛋白從而實現生物分子檢測與分析，為抗原抗體檢測和藥物篩選等領域提供有力的技術支持。然而，傳統蛋白質芯片固相載體蛋白質濃度較低時熒光檢測信號很弱，蛋白質芯片的檢測靈敏度太低，且加工工藝復雜。

發明內容

針對上述現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種可避免出現上述技術缺陷的微流控芯片納米信號增強結構加工方法。

為了實現上述發明目的，本發明提供的技術方案如下：

一種微流控芯片納米信號增強結構加工方法，包括：

步驟一：利用傾斜角沉積的方法在固相載體玻璃片上制備集成金屬納米結構，所述金屬納米結構為金納米結構或銀納米結構；

步驟二：在集成有金屬納米結構的玻璃片表面加入DSP溶液。

進一步地，在所述步驟二中：在集成有金屬納米結構的玻璃片表面加入濃度為3～5mg/ml的DSP溶液，在室溫下反應1.8～2.2h；清洗干凈后，得到金屬納米結構表面鍵合有DSP的集成金屬納米結構玻璃載體。

進一步地，所述微流控芯片納米信號增強結構加工方法還包括：

步驟三：在該玻璃載體上進行ELISA實驗。

進一步地，所述步驟三包括：

步驟(1)在該玻璃載體表面加入18～22μg/ml的cTnI單克隆抗體溶液室溫下反應1.8～2.2h，實現cTnI捕獲；

步驟(2)清洗該玻璃載體后，再加入4～6％的牛血清蛋白溶液室溫下反應0.8～1.2h；

步驟(3)清洗該玻璃載體后，再加入不同濃度的cTnI溶液室溫下反應1.8～2.2h；

步驟(4)清洗該玻璃載體后，加入18～22μg/ml的cTnI多克隆抗體溶液室溫下反應1.8～2.2h；

步驟(5)清洗該玻璃載體后，加入1.8～2.2μg/ml的熒光標記的兔抗山羊IgG溶液室溫下反應0.8～1.2h；

步驟(6)清洗該玻璃載體后，在熒光顯微鏡下測得各濃度cTnI對應的熒光強度，得到熒光免疫曲線，并與未經過化學處理的干凈玻璃片進行對比。

進一步地，在所述步驟(3)中，cTnI溶液的濃度取值范圍為1pg/ml-1μg/ml。

進一步地，所述室溫的溫度范圍是22℃～26℃。