[發(fā)明專利]一種錳過氧化氫酶在枯草芽孢桿菌表達(dá)體系構(gòu)建方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910045910.4 | 申請日： | 2019-01-18 |
| 公開（公告）號： | CN109486777B | 公開（公告）日： | 2021-10-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李正強;王明琦;曹新宇;張闖 | 申請（專利權(quán)）人： | 吉林大學(xué) |
| 主分類號： | C12N9/08 | 分類號： | C12N9/08;C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 22100 | 代理人： | 陳宏偉 |
| 地址： | 130011 吉*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 過氧化氫酶 枯草 芽孢 桿菌 表達(dá) 體系 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種錳過氧化氫酶在枯草芽孢桿菌中表達(dá)構(gòu)建的方法，包括以下步驟：
1）以嗜熱菌Geobacillus sp. WCH70的基因為模板，設(shè)計引物；
上游引物：5' GGAATTCCATATGTGGATTTATGAAAAAAAAT3'；
下游引物: 5' CCGCTCGAGTTAGTGATGGTGATGGTGATGAAAAATTTTATTGCGGT 3' ；
上游引物 5'端CATATG為NdeⅠ酶切位點，保護(hù)堿基GGAATTC；
下游引物5'端CTCGAG為XholⅠ酶切位點，保護(hù)堿基CCG；
通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增3’端含有6個組氨酸標(biāo)簽的嗜熱錳過氧化氫酶GWC基因如：SEQ IDNo. 1所示；
2）將步驟1）得到的嗜熱錳過氧化氫GWC基因，酶切后與酶切后的穿梭質(zhì)粒pBE-S連接，得到重組穿梭質(zhì)粒pBE-S-GWC；
3）將步驟2）得到的重組穿梭質(zhì)粒pBE-S-GWC酶切后與信號肽文庫SP DNA-mix通過同源重組連接，得到質(zhì)粒文庫pBE-S-GWC-SP；
4）將質(zhì)粒文庫pBE-S- GWC -SP轉(zhuǎn)化到枯草芽孢桿菌表達(dá)宿主RIK1285中，選取攜帶48種不同信號肽的重組菌株進(jìn)行表達(dá)，隨后篩選出蛋白分泌能力最高的重組枯草芽孢桿菌是由信號肽yoqH所協(xié)助，yoqH基因如：SEQ ID No. 2所示，即得錳過氧化氫酶工程菌yoqH-RIK1285-GWC。
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