[發明專利]胎盤血CIK細胞的培養方法

在審

• 申請號: 201910045233.6
• 申請日: 2019-01-17
• 公開（公告）號: CN109536445A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 施琳
• 申請（專利權）人: 匯麟生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李青

本發明涉及細胞培養技術領域，具體而言，涉及一種胎盤血CIK細胞的培養方法。該方法包括：1)將由胎盤血分離得到的單核細胞接種于包被有CD3抗體及CD28抗體的培養容器中進行培養；培養體系中的細胞因子為IFN?γ900U/mL～1100U/mL；2)向培養體系中加入IL?2，終濃度為900U/mL～1100U/mL；3)換液，新的培養體系中的細胞因子為IL?2 900U/mL～1100U/mL；所述培養體系中的基礎培養基為含4％～6％自體血漿的VIVO培養基。該方法CIK擴增效果好，且活化的CIK占比更高、T?reg細胞占比更低。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，具體而言，涉及一種胎盤血CIK細胞的培養方法。

背景技術

胎盤是胎兒與母體之間物質交換的重要器官，是人類妊娠期間由胚胎胚膜和母體子宮內膜聯合長成的母子間組織結合器官。胎兒在子宮中發育，依靠胎盤從母體取得營養，而雙方保持相當的獨立性。

胎盤血的采集量一般在150mL以上，最多可以采集250mL，可采集量高于臍帶血。胎盤血中富含原始造血干細胞，其數量和質量與骨髓媲美，數量高于臍帶血中造血干細胞含量。

白細胞含量11～19×10⁹，遠高于外周血，略高于臍帶血。其中的單核細胞含量高于外周血和臍帶血含量，單核細胞的含量將近臍血的2倍。

細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-induced killer cells，CIK)是一群在體外經IL-1α、IL-2、IFN-γ及抗CD3單克隆抗體等誘導而成的以CD3+CD56+細胞為主的CD4+和CD8+效應T細胞群，兼具有T細胞強大的殺瘤活性以及NK細胞的非主要組織相容性復合體(MHC)限制性殺瘤的優點。

與其他過繼免疫治療細胞相比，CIK具有增殖速度快、殺傷活性高、殺瘤譜廣以及副作用小等特點，對正常骨髓造血功能影響甚微，被臨床認為是一種有效的腫瘤免疫治療手段。廣泛應用于腎癌、黑色素瘤、肝癌、胃癌和白血病等多種惡性腫瘤的治療。

CIK可通過多種途徑發揮抗腫瘤作用。CIK對腫瘤細胞有直接殺傷作用，通過分泌顆粒酶和穿孔素穿透靶細胞膜，直接導致腫瘤細胞破裂；CIK具有較強的細胞毒活性，可分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α和GM-CSF等多種細胞因子進一步提高免疫效應細胞的細胞毒作用，不僅對腫瘤細胞有直接抑制作用，還可通過調節免疫系統間接殺傷瘤細胞，誘導腫瘤細胞凋亡。現有技術中的CIK培育方法，普遍存在擴增倍率低、細胞活性差等問題。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新穎的胎盤血細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-induced killer cells，CIK)的培養方法，該方法操作簡單，培養得到CIK質量較好，可用于CIK的大量制備，使該方法更利于推廣和應用。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

本發明涉及一種胎盤血CIK細胞的培養方法，包括：

1)將由胎盤血分離得到的單核細胞接種于包被有CD3抗體及CD28抗體的培養容器中進行培養；培養體系中的細胞因子為IFN-γ900U/mL～1100U/mL；

2)向培養體系中加入IL-2，終濃度為900U/mL～1100U/mL；

3)換液，新的培養體系中的細胞因子為IL-2 900U/mL～1100U/mL。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

CIK擴增效果好，且活化的CIK占比更高、T-reg細胞占比更低。

附圖說明