[發明專利]一種多拉菌素的純化工藝

在審

• 申請號: 201910044855.7
• 申請日: 2019-01-17
• 公開（公告）號: CN109651465A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 馮紅霞;張葵
• 申請（專利權）人: 北大方正集團有限公司;北大醫藥重慶大新藥業股份有限公司;北大醫療產業集團有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明涉及一種多拉菌素的純化工藝。所述純化工藝包括：(1)壓濾：向多拉菌素發酵液中加入絮凝劑，壓濾，得到菌渣；(2)萃取、濃縮：利用有機溶劑對菌渣進行萃取，得到萃取液A；將萃取液A濃縮得到膏狀物，將膏狀物降溫至30℃以下；(3)浸膏萃取：向膏狀物中加入有機溶劑，攪拌，得到萃取液B；(4)分層：向萃取液B中加水攪拌，靜置，分層，將上層液濃縮，降溫抽濾，得到粗品A；(5)重結晶：利用有機溶劑對粗品A進行重結晶，降溫，抽濾，得到濕晶體；干燥，得到多拉菌素成品。本發明的優點在于通過各步驟的結合和相互作用，可得到高純度、高收率的多拉菌素。該工藝簡單易行，安全性更高，適用于工業化推廣。

技術領域

本發明涉及工業微生物技術領域，具體涉及一種多拉菌素的純化工藝。

背景技術

多拉菌素為新型、廣譜抗寄生蟲藥，對胃腸道線蟲、肺線蟲、螨、蜱和傷口蛆等均有高效，用于治療家畜線蟲病和螨病等體外寄生蟲病，主要適用于牛和豬。

現有技術公開了多拉菌素的幾種純化方法，如CN104693254A公開了一種多拉菌素的分離方法，其將發酵液經過浸提、濃縮、打漿、結晶等步驟，得到高純度的多拉菌素。該方法收率較好，步驟簡單，但打漿過程中會產生很多母液，此母液雜質甚多，非常難于回收。

CN108976270A公開了一種高純度多拉菌素的制備方法，該方法將發酵液浸泡、分離，通過超濾膜進行純化，再通過兩次逆流萃取，得到萃取液通過濃縮結晶。該方法使用溶劑均可通過較簡單方式回收利用，但存在所使用的甲苯、正庚烷等溶媒危險度高，實際操作不方便，且使用超納濾膜成本高等缺陷。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

為了克服上述問題，本發明提供一種新的多拉菌素的純化工藝，通過壓濾、萃取、濃縮、浸膏萃取、結晶等步驟的結合和相互作用，可得到高純度、高收率的多拉菌素。該工藝簡單易行，安全性更高，成本相對低廉，適用于工業化推廣。

本發明的技術方案如下：

一種多拉菌素的純化工藝，包括：

(1)壓濾：向多拉菌素發酵液中加入絮凝劑，壓濾，得到菌渣；

(2)萃取、濃縮：利用有機溶劑對菌渣進行萃取，得到萃取液A；將萃取液A濃縮得到膏狀物，將膏狀物降溫至30℃以下；

(3)浸膏萃取：向膏狀物中加入有機溶劑，攪拌，得到萃取液B；

(4)分層：向萃取液B中加水攪拌，靜置，分層，將上層液濃縮，降溫抽濾，得到粗品A；

(5)重結晶：利用有機溶劑對粗品A進行重結晶，降溫，抽濾，得到濕晶體；干燥，得到多拉菌素成品。

下面對各步驟作進一步說明。

步驟(1)中，所述絮凝劑選自聚合氯化鋁、硫酸鋅、黃血鹽；優選聚合氯化鋁；其用量為每升發酵液加入5-10g絮凝劑，優選為每升發酵液加入5-7g絮凝劑；所述壓濾選擇板框壓濾；所得菌渣的水分含量為35-45％，優選38-40％。

步驟(2)中，所述有機溶劑為甲醇、乙醇或醋酸丁酯，優選甲醇，其加入量為每千克菌渣使用2-5L有機溶劑，優選3-4L有機溶劑，萃取時間為6-15h，優選8-12h。

步驟(3)中，所述有機溶劑為二氯甲烷、甲醇或乙醇；優選先加入二氯甲烷攪拌，再加入甲醇攪拌，其目的在于將色素雜質以及蛋白質雜質溶解于甲醇中，這樣得到的二氯甲烷萃取液純度更高；所述二氯甲烷的加入量為膏狀物重量的4-6倍，優選4-5倍，攪拌30-40min；所述甲醇的加入量為膏狀物重量的1-3倍，優選2-3倍，繼續30-40min。

步驟(4)中，所述水的加入量為甲醇用量的10％-20％。為了獲得更好的效果，所述下層液建議重復分層1-2次。所述濃縮可使用旋轉蒸發器，濃縮溫度為45℃-65℃。