[發(fā)明專(zhuān)利]一種免疫定量檢測(cè)方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910042577.1
• 申請(qǐng)日: 2019-01-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109781972B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 買(mǎi)制剛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/53
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/53;G01N33/58
• 代理公司: 深圳市順天達(dá)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44217
• 代理人: 郭偉剛

本發(fā)明公開(kāi)了一種免疫定量檢測(cè)方法，包括以下步驟：步驟S1、通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品和拮抗劑建立競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)?濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；步驟S2、檢測(cè)樣品的競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)，根據(jù)樣品的競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)利用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程來(lái)計(jì)算樣品中待測(cè)抗原的濃度。本發(fā)明的免疫定量檢測(cè)方法通引入特殊設(shè)計(jì)抗原(拮抗劑)把樣本和標(biāo)準(zhǔn)品的免疫反應(yīng)建立關(guān)聯(lián)，再通過(guò)雙色熒光反應(yīng)把熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)處理成為競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)，建立劑量?競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)定量；采用競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)作為定量的反應(yīng)關(guān)系，不僅解決了免疫反應(yīng)條件差異的影響，又能使用存儲(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，不用每次隨樣本做標(biāo)準(zhǔn)曲線，完美解決了免疫分析(包括免疫層析)準(zhǔn)確定量與簡(jiǎn)單方便之間的矛盾。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種免疫定量檢測(cè)方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

免疫檢測(cè)的定量方案有兩種：制作標(biāo)準(zhǔn)曲線定量和相對(duì)比較的半定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線一般是在其檢測(cè)的線性范圍內(nèi)，由多個(gè)(五個(gè)或更多)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品同步與樣本反應(yīng)，根據(jù)其劑量-反應(yīng)關(guān)系確定，連接這些點(diǎn)并擬合生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)樣本的反應(yīng)值來(lái)計(jì)算其濃度，這種方法具有定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，但需要同時(shí)檢測(cè)多個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，一般用在ELISA、化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)等同時(shí)能進(jìn)行多樣本檢測(cè)的技術(shù)中。半定量免疫檢測(cè)是通過(guò)比較樣本反應(yīng)的程度與標(biāo)準(zhǔn)濃度(一般只有一個(gè))的反應(yīng)程度來(lái)大致確定樣本濃度，常用于單個(gè)測(cè)試中，具有簡(jiǎn)單方便的優(yōu)點(diǎn)，但定量誤差大、準(zhǔn)確度低。

但是，無(wú)論是標(biāo)準(zhǔn)曲線法還是半定量法，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本之間都是各自反應(yīng)，兩者反應(yīng)的關(guān)聯(lián)度不強(qiáng)，無(wú)論哪一方發(fā)生問(wèn)題都會(huì)影響最終定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種免疫定量檢測(cè)方法和應(yīng)用以實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確的免疫定量檢測(cè)。

一方面，本發(fā)明提供一種免疫定量檢測(cè)方法，包括以下步驟：

步驟S1、通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品和拮抗劑建立競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)-濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

步驟S2、檢測(cè)樣品的競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)，根據(jù)所述樣品的競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)利用所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程來(lái)計(jì)算樣品中待測(cè)抗原的濃度。

在本發(fā)明提供的免疫定量檢測(cè)方法中，所述標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原和所述樣品中的待測(cè)抗原包含第一抗體識(shí)別位點(diǎn)和第二抗體識(shí)別位點(diǎn)，不含第三抗體識(shí)別位點(diǎn)；所述拮抗劑為包含第一抗體識(shí)別位點(diǎn)和第三抗體識(shí)別位點(diǎn)、不含第二抗體識(shí)別位點(diǎn)的抗原；使用第一熒光物質(zhì)標(biāo)記所述第二抗體，使用第二熒光物質(zhì)標(biāo)記所述第三抗體。

在本發(fā)明提供的免疫定量檢測(cè)方法中，所述第三抗體可識(shí)別基因工程抗原標(biāo)簽蛋白(包含且不限于MyC、His、GST、HA、GFP、CFP、YFP、熒光素酶等)或其他的位點(diǎn)，不能識(shí)別所述標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原和所述樣品中的待測(cè)抗原上的位點(diǎn)。

在本發(fā)明提供的免疫定量檢測(cè)方法中，可以使用特異反應(yīng)的結(jié)合物和配體(包含且不限于親和素與生物素、酶與底物、受體與配體、蛋白質(zhì)與適配體等)來(lái)代替所述第三抗體及其抗原位點(diǎn)。

在本發(fā)明提供的免疫定量檢測(cè)方法中，所述步驟S1包括：

步驟S11、將所述標(biāo)準(zhǔn)品與所述拮抗劑的混合物與標(biāo)記物液體反應(yīng)，去除未反應(yīng)的液體；

步驟S12、檢測(cè)所述第一熒光物質(zhì)和所述第二熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，計(jì)算競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)，所述競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)＝所述第一熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度/所述第二熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度；

步驟S13、改變所述標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，重復(fù)步驟S11和步驟S12，得到對(duì)應(yīng)的競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)；

步驟S14、利用標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對(duì)應(yīng)的競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)繪制所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

在本發(fā)明提供的免疫定量檢測(cè)方法中，所述步驟S2包括：

步驟S21、將所述樣品與所述拮抗劑的混合物與標(biāo)記物液體反應(yīng)，去除未反應(yīng)的液體；

步驟S22、檢測(cè)所述第一熒光物質(zhì)和所述第二熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，計(jì)算競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)；