[發明專利]一種液質聯用測定血漿中伊馬替尼濃度的方法

在審

• 申請號: 201910040163.5
• 申請日: 2019-01-16
• 公開（公告）號: CN109682914A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 黃靖智
• 申請（專利權）人: 徐州立興佳正醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/34
• 代理公司: 徐州市淮海專利事務所 32205
• 代理人: 李妮

本發明公開了一種液質聯用測定血漿中伊馬替尼濃度的方法，采用液質聯用系統測定，先取待測樣品，加入一定量的混合有機溶劑進行萃取兩次，預處理后，經色譜柱分離，用質譜檢測器檢測。本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為伊馬替尼的血藥濃度測定提供依據；本方法的血漿標準曲線線性范圍為10～5000ng/mL，批內和批間精密度RSD均小于±15％，適合于測定血漿中伊馬替尼的濃度。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種藥物的測定方法，特別涉及一種液質聯用測定血漿中伊馬替尼濃度的方法。

背景技術

伊馬替尼(Imatinib)是一種用于治療費城染色體(Ber－Abl)陽性的慢性骨髓性白血病(簡稱CML)成人患者的急變期、加速期和干擾素治療失敗后的慢性期的口服藥物。CML是一種由于骨髓中干細胞的DNA異常而引起的造血干細胞疾病。DNA異常會產生異常蛋白質，干擾骨髓中白細胞正常生成過程，最終導致白細胞數目的急劇增加。CML分為慢性期、加速期和危象期三個階段，危象期患者的平均存活肘間只有2～3個月。伊馬替尼對胃腸道間質瘤治療也有效，有效率在50％左右，是一種具有良好開發前景的藥源化合物，其結構式如下：

目前，現有關于伊馬替尼測定方法的速度、精度和靈敏度均有待提高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種液質聯用測定血漿中伊馬替尼濃度的方法，該方法可提高檢測的速度、精度和靈敏度。

為實現上述目的，一種測定血漿中伊馬替尼濃度的方法，血漿樣品經預處理后經高效液相色譜-串聯質譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：

(1)血漿樣品預處理：

血漿以K₂EDTA為抗凝劑，以伊馬替尼-d8為內標；于96深孔板中精密加入100uL的血漿樣品，加入5uL的體積比為1：1的甲醇水溶液，混勻后加入5uL的2ng/uL的內標伊馬替尼-d8溶液，混勻后加入1000uL的混合有機溶劑Ⅰ，混合有機溶劑Ⅰ為乙腈：甲酸按照體積比99：1混合得到的混合物，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心10min，取上層清液20uL至裝有1000uL混合有機溶劑Ⅱ的96深孔板中，混合有機溶劑Ⅱ為甲醇：水：甲酸：1mol/L的醋酸銨按照體積比85：15：0.3：0.5混合得到的混合物，渦旋混勻，于20℃以3000rpm離心5min后作為測試樣品待檢測；

(2)試樣測定：

取10uL測試樣品注入高效液相色譜-串聯質譜儀中，檢測樣品中伊馬替尼和內標伊馬替尼-d8的色譜峰，并據此計算所述血漿樣品中的伊馬替尼濃度；

(3)液相色譜測定，條件為：

色譜柱：Restek Allure PFPP，5um，柱規格為50×2.1mm；色譜柱溫：40℃；流動相A：水/甲酸/1mol/L的醋酸銨的體積比為100/0.3/0.5；流動相B：乙腈/水/甲酸/1mol/L的醋酸銨的體積比為98/2/0.3/0.5；洗液：甲醇/甲酸的體積比為99/1；自動進樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.4mL/min，進樣量為10uL，分析時間4min；

(4)質譜測定，條件為：

離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為4000V，霧化溫度為500℃噴霧氣壓力為15Psi，輔助加熱氣壓力為15Psi，氣簾氣壓力為35Psi，碰撞氣壓力為8Psi，去簇電壓分別為50eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；碰撞室入口電壓分別為8eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；碰撞電壓分別為35eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；碰撞室出口電壓分別為20eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；正離子方式檢測；掃描方式為多反應監測MRM；用于定量分析的離子反應分別為：m/z494.3→m/z394.0，其為伊馬替尼；和m/z502.3→m/z393.5，其為伊馬替尼-d8。