[發(fā)明專(zhuān)利]一種液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定血漿中伊馬替尼濃度的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910040163.5
• 申請(qǐng)日: 2019-01-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109682914A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃靖智
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 徐州立興佳正醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/34
• 代理公司: 徐州市淮海專(zhuān)利事務(wù)所 32205
• 代理人: 李妮

1.一種液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定血漿中伊馬替尼濃度的方法，其特征在于：血漿樣品經(jīng)預(yù)處理后經(jīng)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)其濃度，具體方法包括以下步驟：

(1)血漿樣品預(yù)處理：

血漿以K₂EDTA為抗凝劑，以伊馬替尼-d8為內(nèi)標(biāo)；于96深孔板中精密加入100uL的血漿樣品，加入5uL的體積比為1：1的甲醇水溶液，混勻后加入5uL的2ng/uL的內(nèi)標(biāo)伊馬替尼-d8溶液，混勻后加入1000uL的混合有機(jī)溶劑Ⅰ，混合有機(jī)溶劑Ⅰ為乙腈：甲酸按照體積比99：1混合得到的混合物，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心10min，取上層清液20uL至裝有1000uL混合有機(jī)溶劑Ⅱ的96深孔板中，混合有機(jī)溶劑Ⅱ?yàn)榧状迹核杭姿幔?mol/L的醋酸銨按照體積比85：15：0.3：0.5混合得到的混合物，渦旋混勻，于20℃以3000rpm離心5min后作為測(cè)試樣品待檢測(cè)；

(2)試樣測(cè)定：

取10uL測(cè)試樣品注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，檢測(cè)樣品中伊馬替尼和內(nèi)標(biāo)伊馬替尼-d8的色譜峰，并據(jù)此計(jì)算所述血漿樣品中的伊馬替尼濃度；

(3)液相色譜測(cè)定，條件為：

色譜柱：RestekAllure PFPP，5um，柱規(guī)格為50×2.1mm；色譜柱溫：40℃；流動(dòng)相A：水/甲酸/1mol/L的醋酸銨的體積比為100/0.3/0.5；流動(dòng)相B：乙腈/水/甲酸/1mol/L的醋酸銨的體積比為98/2/0.3/0.5；洗液：甲醇/甲酸的體積比為99/1；自動(dòng)進(jìn)樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.4mL/min，進(jìn)樣量為10uL，分析時(shí)間4min；

(4)質(zhì)譜測(cè)定，條件為：

離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為4000V，霧化溫度為500℃，噴霧氣壓力為15Psi，輔助加熱氣壓力為15Psi，氣簾氣壓力為35Psi，碰撞氣壓力為8Psi，去簇電壓分別為50eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；碰撞室入口電壓分別為8eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；碰撞電壓分別為35eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；碰撞室出口電壓分別為20eV的伊馬替尼和伊馬替尼-d8；正離子方式檢測(cè)；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM；

用于定量分析的離子反應(yīng)分別為：m/z494.3→m/z394.0，其為伊馬替尼；和m/z502.3→m/z393.5，其為伊馬替尼-d8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定血漿中伊馬替尼濃度的方法，其特征在于：所述步驟(3)中梯度洗脫的程序?yàn)椋?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定血漿中伊馬替尼濃度的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，采用內(nèi)標(biāo)法，以伊馬替尼和內(nèi)標(biāo)伊馬替尼-d8的峰面積比值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算所述血漿樣品中的伊馬替尼的濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定血漿中伊馬替尼濃度的方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程的建立包括以下步驟：

取100uL空白血漿10份置于96深孔板中，以貯備液的形式添加5uL濃度分別為0.2ng/μL、0.4ng/μL、1ng/μL、2ng/μL、10ng/μL、20ng/μL、40ng/μL、100ng/μL的伊馬替尼溶液至最低定量下限樣本、標(biāo)樣1、標(biāo)樣2、標(biāo)樣3、標(biāo)樣4、標(biāo)樣5、標(biāo)樣6、最高定量上限樣本中，分別加入5uL的體積比為1：1的甲醇水溶液至空白樣本和零濃度樣本，混勻后分別向最低定量下限樣本、標(biāo)樣1、標(biāo)樣2、標(biāo)樣3、標(biāo)樣4、標(biāo)樣5、標(biāo)樣6、最高定量上限樣本、零濃度樣本中加入5uL的2ng/uL的內(nèi)標(biāo)伊馬替尼-d8溶液，向空白樣本中加入5uL的體積比為1：1的甲醇水溶液，混勻后分別向10份樣本中加入1000uL的混合有機(jī)溶劑Ⅰ，混合有機(jī)溶劑Ⅰ為乙腈：甲酸按照體積比99：1混合得到的混合物，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心10min，分別取上層清液20uL至裝有1000uL混合有機(jī)溶劑Ⅱ的96深孔板中，混合有機(jī)溶劑Ⅱ?yàn)榧状迹核杭姿幔?mol/L的醋酸銨按照體積比85：15：0.3：0.5混合得到的混合物，渦旋混勻，于20℃以3000rpm離心5min后作為10份標(biāo)準(zhǔn)樣品待檢測(cè)；

分別取10uL標(biāo)準(zhǔn)樣品注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，檢測(cè)樣品中的伊馬替尼和內(nèi)標(biāo)伊馬替尼-d8的色譜峰，并據(jù)此得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，以用于計(jì)算所述血漿中的伊馬替尼的濃度。