[發明專利]一種液質聯用測定血漿中塞來昔布濃度的方法

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• 申請號: 201910039851.X
• 申請日: 2019-01-16
• 公開（公告）號: CN109682912A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 黃靖智
• 申請（專利權）人: 徐州立興佳正醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/34
• 代理公司: 徐州市淮海專利事務所 32205
• 代理人: 李妮

本發明公開了一種液質聯用測定血漿中塞來昔布濃度的方法，采用液質聯用系統測定，先取待測樣品，加入一定量的混合有機溶劑進行萃取兩次，預處理后，經色譜柱分離，用質譜檢測器檢測。本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為塞來昔布的血藥濃度測定提供依據；本方法的血漿標準曲線線性范圍為10～2000ng/mL，批內和批間精密度RSD均小于±15％，適合于測定血漿中塞來昔布的濃度。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種藥物的測定方法，特別涉及一種液質聯用測定血漿中塞來昔布濃度的方法。

背景技術

塞來昔布，是新一代非甾體抗炎鎮痛藥，通過選擇性抑制環氧化酶-2(COX-2)來抑制前列腺素生成，達到抗炎癥、鎮痛的效果。由于塞來昔布不會抑制具有胃腸道保護作用的生理酶——環氧化酶-1(COX-1)，它的胃腸道不良反應風險明顯低于傳統非甾體抗炎鎮痛藥。

塞來昔布(Celecoxib)，商品名：西樂葆，化學名：4-[5-(4-甲苯基)-3-(三氟甲基)-1氫-1-吡唑-1-基]苯磺酰胺(CAS：169590-42-5)，其結構式如下：

目前，尚未關于塞來昔布測定方法的文獻報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種液質聯用測定血漿中塞來昔布濃度的方法，該方法可提高檢測的速度、精度和靈敏度。

為實現上述目的，一種液質聯用測定血漿中塞來昔布濃度的方法，其特征在于：血漿樣品經預處理后經高效液相色譜-串聯質譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：

(1)血漿樣品預處理：

血漿以K₂EDTA為抗凝劑，以塞來昔布-d7為內標；于96深孔板中精密加入100uL的血漿樣品，加入5uL的體積比為1：1的甲醇水溶液，混勻后加入5uL的2ng/uL的內標塞來昔布-d7溶液，混勻后加入1000uL乙腈于96深孔板中，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心10min，取上層清液50uL至裝有450uL混合有機溶劑的96深孔板中，混合有機溶劑為乙腈：水：甲酸按照體積比50：50：0.2混合得到的混合物，渦旋混勻，于20℃以3000rpm離心5min后作為測試樣品待檢測；

(5)試樣測定：

取10uL測試樣品注入高效液相色譜-串聯質譜儀中，檢測樣品中塞來昔布和內標塞來昔布-d7的色譜峰，并據此計算所述血漿樣品中的塞來昔布濃度；

(6)液相色譜測定，條件為：

色譜柱：Agilent ZORBAX XDB-C18，5um，柱規格為50×2.1mm；色譜柱溫：40℃；流動相A：水/甲酸的體積百分比為100/0.2；流動相B：乙腈/甲酸的體積百分比為100/0.2；洗液：乙腈/水的體積百分比為50/50；自動進樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.4mL/min，進樣量為10uL，分析時間3.5min；

(7)質譜測定，條件為：

離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為5000V，霧化溫度為480℃，噴霧氣壓力為20Psi，輔助加熱氣壓力為20Psi，氣簾氣壓力為30Psi，碰撞氣壓力為Low，去簇電壓分別為25eV的塞來昔布和塞來昔布-d7；碰撞室入口電壓分別為8eV的塞來昔布和塞來昔布-d7；碰撞電壓分別為37eV的塞來昔布和塞來昔布-d7；碰撞室出口電壓分別為15eV的塞來昔布和塞來昔布-d7；正離子方式檢測；掃描方式為多重反應監測；

用于定量分析的離子反應分別為：m/z382.1→m/z362.1，其為塞來昔布；和m/z389.1→m/z369.1，其為塞來昔布-d7。

優選的，所述步驟(3)中梯度洗脫的程序為：