[發(fā)明專(zhuān)利]一種黃精品種復(fù)壯的組培快繁方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910036715.5
• 申請(qǐng)日: 2019-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111434218A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 武蕓;鄭小江;廖朝林;向戌蓮;王鋒;劉琴;楊澤娃;鄭宇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖北民族學(xué)院;恩施土家族苗族自治州大地生物科技研究所
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 武漢宇晨專(zhuān)利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

本發(fā)明公開(kāi)了一種恩施黃精品種復(fù)壯的組培快繁方法。該技術(shù)包括如下步驟：以黃精塊莖為材料，用組培技術(shù)培養(yǎng)出無(wú)菌苗，再以無(wú)菌苗莖尖為外植體，快速脫毒，培養(yǎng)出優(yōu)質(zhì)的黃精。包括塊莖的選取與滅菌、培養(yǎng)基的配制、誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)、壯苗生根培養(yǎng)及馴化煉苗移栽。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，易于掌握，可在人工控制條件下高效培育優(yōu)質(zhì)恩施黃精脫毒種苗。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物品種的組培快繁技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種恩施黃精品種復(fù)壯的組培快繁方法。

技術(shù)背景

黃精(Polygonatum sibiricum)是百合科黃精屬多年生的草本植物，黃精的化學(xué)成分主要有多糖、皂苷、蒽醌、黃酮、氨基酸及微量元素，黃精可食用，藥用和觀賞等。黃精性平，味甘，具有降血脂和抗動(dòng)脈粥樣化、調(diào)節(jié)免疫力、治療糖尿病、防治腫瘤、增強(qiáng)記憶力、治療抑郁癥、抗病毒、抑制和降低葡萄糖苷酶的活性等方面的作用。湖北省恩施州，自然地理環(huán)境優(yōu)越，屬我國(guó)重要的中藥材生產(chǎn)基地，素有“華中藥庫(kù)”和“世界硒都”之稱(chēng)，其出產(chǎn)的中藥材有效成分含量高、品質(zhì)佳且含有一定的天然硒.恩施是黃精生長(zhǎng)的絕佳產(chǎn)區(qū)，其資源豐富。由于恩施黃精種植時(shí)間較長(zhǎng)且種苗均采用塊莖繁殖，其品種退化較為嚴(yán)重，使恩施黃精的產(chǎn)量及品質(zhì)均有所下降。

然而莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)(約0.1～1.0mm區(qū)域)則幾乎不含病毒。這是因?yàn)椴《局荒芡ㄟ^(guò)胞間連絲傳遞，分生區(qū)域內(nèi)無(wú)維管束。采用莖尖脫毒效果好，后代穩(wěn)定，是培育無(wú)病毒苗的一個(gè)重要途徑。

本發(fā)明通過(guò)黃精莖尖的組織培養(yǎng)得到了一種恩施黃精品種復(fù)壯的組培快繁技術(shù)，并確定了進(jìn)行組織培養(yǎng)的幾個(gè)培養(yǎng)基的最佳方案。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種恩施黃精品種復(fù)壯的組培快繁方法，該方法易行，操作簡(jiǎn)便，一是繁殖效率高，以無(wú)菌苗的莖尖為外植體，能有效地減少接種污染率，脫去植物體細(xì)胞內(nèi)的病毒，成功率可達(dá)95％；二是條件可人工控制，通過(guò)莖尖直接誘導(dǎo)出芽，再誘導(dǎo)叢生芽增值，其增值倍數(shù)高，繁殖速度快，能高效培育優(yōu)質(zhì)的恩施黃精脫毒種苗。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種恩施黃精品種復(fù)壯的組培快繁方法，包括如下步驟：

(1)無(wú)菌苗的獲得：取恩施黃精地下塊莖，洗凈后放于超凈臺(tái)上，用解剖刀將帶芽眼的塊莖切成方形小塊；用酒精震蕩沖洗黃精小塊莖28-32s后轉(zhuǎn)入0.1％的升汞溶液中消毒7～9min，然后用無(wú)菌水沖洗5～6次，再用吸水紙將消毒后黃精塊莖中的水吸干，之后接種到組成為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)29-31天后從芽眼長(zhǎng)出無(wú)菌苗；

(2)莖尖的培養(yǎng)：在解剖鏡下切下步驟(1)所獲得無(wú)菌苗的莖尖，接種到組成為1/2MS+6-BA0.5mg/L+0.7mg/LNAA的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24-26天后長(zhǎng)出不定芽；

(3)不定芽的增值：將步驟(2)獲得的不定芽轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)30-40天后獲得長(zhǎng)度為到3～5cm的增殖叢生芽；

(4)壯苗培養(yǎng)：將步驟(3)獲得的增殖叢生芽切分成單株苗轉(zhuǎn)接到MS基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)30～40天；

(5)生根培養(yǎng)：將經(jīng)過(guò)步驟(4)壯苗培養(yǎng)后的單株苗接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)20～30天，幼苗基部長(zhǎng)出3～8條根，繼續(xù)培養(yǎng)至50-60天，獲得生根數(shù)多、根長(zhǎng)、根壯的生根組培苗；

(6)移栽：將步驟(5)獲得的生根組培苗移栽到基質(zhì)中，在溫室中培育1個(gè)月左右后，再移到室外培育1個(gè)月左右便可移栽至大田成苗。

其中，所述步驟(1)-(6)中各組培階段的培養(yǎng)條件是：光照強(qiáng)度為40μmol.m^-2.s^-1，光照時(shí)間12h/d，其中培養(yǎng)基pH5.8-6.0，培養(yǎng)溫度為20～21℃；蔗糖均為25g/L，瓊脂為6.2g/L。