[發明專利]應用于對蝦病原高通量檢測的玻片微量檢測系統

有效

• 申請號: 201910030938.0
• 申請日: 2019-01-14
• 公開（公告）號: CN109679836B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 黃倢;曹志;李晨;萬曉媛;謝國駟;董宣
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 朱昀

本發明屬微生物檢測領域，尤其涉及一種應用于對蝦病原高通量檢測的玻片微量檢測系統。該系統包括設有檢測擴增池的微量檢測玻片、微量移液器以及用于可視化核酸擴增檢測的成像設備；其中，所述檢測池設有預包被的反應試劑和特定病原的特異性引物。本發明在已建立的對蝦病原核酸恒溫擴增新技術的基礎上，開發了一款玻片微量檢測系統，具有檢測試劑低耗化、設備微型化、操作便捷化等優勢；是一種快速便攜、低耗低廉、靈敏特異以及高通量檢測分析手段。

技術領域

本發明屬微生物檢測領域，尤其涉及一種應用于對蝦病原高通量檢測的玻片微量檢測系統。

背景技術

截止2018年，被世界動物衛生組織(World Organization for Animal Health，OIE)《水生動物衛生法典》收錄的甲殼類疫病共有11種，未收錄的其他對蝦疾病10余種，新發對蝦疫病2種。2018年，本課題組在我國廣東、廣西、海南等主要養殖對蝦的9個省市開展了對蝦的流行病學調查，其中，主要疫病陽性檢出率依次為偷死野田村病毒(Covertmortality nodavirus,CMNV)(29.15％)、對蝦腸孢子蟲(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)(17.07％)、致急性肝胰腺壞死病副溶血弧菌(Acute hepatopancreas necrosisdisease-causing Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)(13.21％)、傳染性皮下及造血組織壞死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV)(8.70％)、對蝦白斑綜合癥病毒(White spot syndrome virus,WSSV)(6.82％)、桃拉綜合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)(6.82％)、蝦血細胞虹彩病毒(Shrimp hemocyteiridescent virus,SHIV)(5.66％)、黃頭病毒(Yellow head virus,YHV)(0.0％)和傳染性肌壞死病毒(Infectious myonecrosis virus,IMNV)(0.0％)，威脅對蝦養殖的病原多，且呈混合感染。當前，對蝦病原監測主要是采用收集樣品后在實驗室基于核酸分析的檢測，聚合酶鏈反應(Polymerase chain reaction,PCR)、實時定量熒光PCR(Real-time PCR)及基因芯片等技術以其靈敏度高、檢測快速、多目標分析而被廣泛應用。然而此類分析需要特殊的儀器設備，如PCR儀以及配套的電泳儀和凝膠成像儀、實時熒光PCR儀、基因芯片掃描儀等，耗時費力，成本昂貴，不適合簡便快速分析。因此，開發高通量、高靈敏、低成本的適用于現場即時分析的新型病原檢測技術勢在必行。

基于核酸恒溫擴增技術(Nucleic acid isothermal amplificationtechnology,NAIAT)的核酸檢測方法能夠實現快速、簡單、高效的擴增，且對儀器依賴性低，非常適用于現場快速檢測(Point-of-care test,POCT)中，是一種極具應用潛力的核酸分析手段。本課題組近年來致力于對蝦病原快速檢測技術的研究，將NAIAT應用于對蝦病原檢測中，目前已成功研制出對蝦WSSV、IHHNV、TSV、YHV、SHIV等一系列現場快速靈敏檢測技術和檢測試劑盒，但在實際應用中，存在一定的局限性：(1)基于肉眼判讀的可視化結果的精確性存在局限性；(2)一次樣本僅單重檢測，很難實現多重目標的同時檢測且檢測成本過高；(3)操作流程的便捷性還有待進一步提高。

低體積PCR技術已被用于單細胞分離和檢驗，基于NAIAT的低體積擴增主要集中于研究微流控芯片技術。近年來，基于微流控芯片的核酸研究技術發展勢頭強勁，如，微流控芯片數字PCR技術和基于NAIAT的微流控芯片系統；然而基于微流控芯片技術的擴增檢測，一般需要高精密的儀器設備，芯片的研發成本和生產成本均很昂貴，限制了其在臨床快速檢測中的應用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是基于微流控芯片技術的擴增檢測，一般需要高精密的儀器設備，芯片的研發成本和生產成本均很昂貴，限制了其在臨床快速檢測中的應用。