[發明專利]應用于對蝦病原高通量檢測的玻片微量檢測系統

有效

• 申請號: 201910030938.0
• 申請日: 2019-01-14
• 公開（公告）號: CN109679836B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 黃倢;曹志;李晨;萬曉媛;謝國駟;董宣
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 朱昀

1.應用于對蝦病原高通量檢測的玻片微量檢測系統，其特征在于：包括設有檢測擴增池的微量檢測玻片、微量移液器以及用于可視化核酸擴增檢測的成像設備；微量檢測玻片經絲網印刷疏水、疏油涂層，預留出檢測擴增池，檢測擴增池經超親水改性，并且設有預包被的反應試劑和特定病原的特異性引物，檢測擴增池在檢測時設置封堵件；微量移液器由2～8根專用移液針組成，移液針為圓柱體，直徑為1mm，移液針側表面涂布超疏水疏油涂層，底面經超親水處理；成像設備內設有電池、LED恒流驅動IC和藍色LED，三者之間通過線路連接，成像設備內還設有玻片槽，玻片槽上方設有金黃色的濾光片，玻片槽兩側等間距、對稱的各設置有4個藍色LED。

2.如權利要求1所述的應用于對蝦病原高通量檢測的玻片微量檢測系統，其特征在于：所述微量檢測玻片共設置有48組相同的檢測池，所述各檢測池呈4×12布置，每12個檢測池1行，分別對應設置4列。

3.如權利要求1所述的應用于對蝦病原高通量檢測的玻片微量檢測系統，其特征在于：所述封堵件為二甲基硅油。

4.一種權利要求1中的微量檢測玻片的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)制版：菲林——曝光——硬化——顯影；

(2)絲網印刷疏水、疏油涂層；步驟(2)為①調配專用油墨，要求疏水疏油，為在基礎油墨中添加聚四氟乙烯專用樹脂、氟碳添加劑、二氧化硅中的一種或一種以上的混合物；②把做好的網版裝入絲印臺，作準定位；③將調配好的油墨倒入絲網，進行絲網印刷，印完的玻片插入專用合金架子；

(3)玻片固化；

(4)玻片清潔處理；

(5)檢測池超親水處理；

(6)檢測池預包被檢測試劑；

(7)玻片檢測池預包埋檢測試劑凍干處理；所述步驟(7)檢測池預包埋檢測試劑的凍干保護劑分別為明膠、海藻糖、牛血清白蛋白BSA、硫脲，占比依次為質量體積比2％～3％、10％～15％、1％～2％、1％～2％；

(8)玻片真空包裝得到合格品。

5.如權利要求4所述的微量檢測玻片的制備方法，其特征在于：微量檢測玻片質地為常規載玻片，尺寸為25×75mm；檢測池直徑為2.25mm，檢測池之間的間距為3.00mm。

6.如權利要求4所述的微量檢測玻片的制備方法，其特征在于：步驟(1)為①根據微量檢測玻片的結構示意圖制作菲林；②用300目的絲網制作網版，等干燥后備用；③將做成的空白網版進行脫脂清洗處理，備用；④在潔凈的網版上涂布感光膠，必要的時候多次涂布；⑤在鼓風干燥箱中烘干上膠的網版，多次涂布多次烘干；⑥將菲林感光面向上放置在曬版臺玻璃上，放上涂布好的網版，真空抽氣使菲林與絲網版緊密貼牢，打開曬版燈進行感光制版；⑦把感光結束的網版在水里沖洗顯影，觀察制版效果，達到質量要求就放入烘箱中烘干。

7.如權利要求4所述的微量檢測玻片的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)為將玻片連架子一起放入鼓風干燥箱，200℃烘烤90min，使油墨充分固化；步驟(4)為把固化后的成品載玻片放入清洗劑浸泡80min，然后在清洗機進行后道清洗，對清洗干凈的玻片檢驗；步驟(5)為將超親水ZXL-CQS納米自潔液均勻涂抹或噴灑于各檢測池內，固化干燥后即可。

8.如權利要求4所述的微量檢測玻片的制備方法，其特征在于：所述步驟(6)各檢測池分別預包埋檢測試劑：Bst 2.0WarmDNA聚合酶、WarmRTx反轉錄酶、10×Bstbuffer、10mM dNTPs、5M Betaine、100mM MgSO₄、350mM MnCl₂、3.5mM Caclein、ddH₂O以及對蝦8種病原的特異性引物，所述對蝦8種病原包括對蝦WSSV、IHHNV、SHIV、AHPND、EHP、YHV-8、TSV、CMNV。