[發(fā)明專利]一種酶法拆分制備N-甲基-D-天冬氨酸的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910030583.5 | 申請(qǐng)日： | 2019-01-14 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109628519B | 公開（公告）日： | 2021-08-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 辛瑜;張梁;張瑤;高秋月 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12P13/20 | 分類號(hào)： | C12P13/20;C12P41/00 |
| 代理公司： | 無(wú)錫華源專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32228 | 代理人： | 聶啟新 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 拆分 制備 甲基 天冬氨酸 方法 | ||
1.一種酶法拆分制備N-甲基-D-天冬氨酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
（1）用Thermomicrobium roseum 肌氨酸氧化酶基因構(gòu)建成pMA5-YwbN -trsox質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化Bacillus subtilis WB600細(xì)胞中進(jìn)行分泌性表達(dá)；所述pMA5-YwbN -trsox質(zhì)粒中YwbN -trso的基因序列如SEQ ID NO.1所示；
（2）將轉(zhuǎn)入pMA5-YwbN -trsox基因質(zhì)粒的Bacillus subtilis WB600細(xì)胞進(jìn)行發(fā)酵，獲得的培養(yǎng)液上清與N-甲基-DL-天冬氨酸溶液混合，針對(duì)N-甲基-L-天冬氨酸進(jìn)行具有手性選擇性的生物催化；
（3）采用等電點(diǎn)結(jié)晶法分離得到N-甲基-D天冬氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述pMA5-YwbN
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述手性選擇性生物催化的方法為：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述等電點(diǎn)結(jié)晶法的具體過程為，酶轉(zhuǎn)化結(jié)束后，加入0.2-0.5w/v%的明礬在60℃絮凝2 h，板框過濾去除絮凝物，使用濃硫酸將溶液pH值調(diào)節(jié)至2-4，將N-甲基-D-天冬氨酸潔凈析出，并進(jìn)行一次重結(jié)晶。
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