[發(fā)明專利]環(huán)介導等溫擴增單增李斯特菌的引物、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910027710.6
• 申請日: 2019-01-11
• 公開（公告）號: CN109593866A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設計）人: 朱麗萍;顏世敢
• 申請（專利權）人: 齊魯工業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
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1.一種環(huán)介導等溫擴增單增李斯特菌的檢測引物、檢測試劑盒及檢測方法，其特征在于包括檢測引物、試劑盒及檢測方法。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測引物，其特征在于包括2對引物，序列如下：

引物F3：5’-AATGCCACTAAATCAAACGT-3’(SEQ ID No.1)，

引物B3：5’-GCGCCGAAGTTTACATTCA-3’(SEQ ID No.2)，

引物FIP：5’-ACTTACATTTGGATAAGCTTGAGCAACGCAGTAAATACATTAGTGGAA-3’(SEQ IDNo.3)，

引物BIP：5’-TTATGATGACGAAATGGCTTACAGTCAGCTTTAAATGCTGTACCAA-3’(SEQ IDNo.4)。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的檢測引物，其特征在于每25ul LAMP反應液中含有引物F3、B3各5pmol，引物FIP、BIP各40pmol。

4.根據(jù)權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于包括LAMP反應液、陽性DNA模板以及權利要求1或2所述的2對引物。

5.根據(jù)權利要求1或4所述的LAMP反應液，其特征在于每25μL LAMP反應液，含有以下組分：20mM Tris-HCl(pH8.8)，10mM KCl，8mM MgSO₄，10mM(NH₄)₂SO₄，0.1％吐溫20，0.8M甜菜堿，1.4mM dNTPs，8U Bst DNA聚合酶，0.05mM鈣黃綠素，0.6mM MnCl₂，用滅菌雙蒸水補足體積至25ul。

6.根據(jù)權利要求1或4所述的陽性DNA模板，其特征在于DNA序列為:AATGCCACTAAATCAAACGTTAACAACGCAGTAAATACATTAGTGGAAAGATGGAATGAAAAATATGCTCAAGCTTATCCAAATGTAAGTGCAAAAATTGATTATGATGACGAAATGGCTTACAGTGAATCACAATTAATTGCGAAATTTGGTACAGCATTTAAAGCTGTAAATAATAGCTTGAATGTAAACTTCGGCGCA(SEQ ID No.5)的DNA片段的pMD18-T重組質粒。

7.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其特征在于在反應管內添加2對引物、LAMP反應液、陽性DNA模板或待檢樣品DNA，混勻，在59-65℃范圍內選擇某一固定溫度恒溫擴增30-60分鐘，然后85℃作用5分鐘終止反應。

8.根據(jù)權利要求1所述的檢測引物、試劑盒和檢測方法，其特征在于在檢測臨床樣品里存在的單增李斯特菌中的應用。