[發(fā)明專利]一種荊半夏組織培養(yǎng)快速繁殖方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910026232.7
• 申請(qǐng)日: 2019-01-11
• 公開（公告）號(hào): CN109757373A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張建;趙振軍;武彥芳;曹運(yùn)梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長江大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

1.一種荊半夏組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

步驟1、培養(yǎng)基的配制：

基本培養(yǎng)基：用MS培養(yǎng)基，蔗糖或白糖20～30g/L，瓊脂7～9g/L，pH5.6～5.8；

誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.4～0.6mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+瓊脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

愈傷組織增殖培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

愈傷組織分化培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+瓊脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；或者為

MS+TDZ 0.5mg/L+瓊脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

液體加速培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

固體壯苗培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

步驟2、外植體的選擇：取半夏的種子，經(jīng)滅菌處理，催芽，取其莖段作為脫毒組培用的外植體；

步驟3、培養(yǎng)基誘導(dǎo)獲得愈傷組織：將外植體置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)得到愈傷組織；

步驟4、愈傷組織增殖培養(yǎng)：將步驟3得到的愈傷組織切成塊，置于愈傷組織增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)獲得大量愈傷組織；

步驟5、愈傷組織分化培養(yǎng)：將步驟4中得到的愈傷組織置于愈傷組織分化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)獲得大量綠色叢芽；

步驟6、加速培養(yǎng)：將帶有綠色叢芽的愈傷組織置于液體加速培養(yǎng)基培養(yǎng)初步分化好的半夏幼苗；

步驟7、壯苗培養(yǎng)：將步驟6得到的初步分化好的半夏幼苗置于固體壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成高度5cm以上的組培苗；

步驟8、煉苗移栽：將所述組培苗的根系沖洗干凈，栽培于草炭土上培養(yǎng)。

2.如權(quán)利要求1所述的荊半夏組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟2中培養(yǎng)基的配制：

誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+瓊脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

愈傷組織增殖培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

愈傷組織分化培養(yǎng)基：MS+TDZ 0.5mg/L+瓊脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

液體加速培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

固體壯苗培養(yǎng)基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8。

3.如權(quán)利要求1所述的荊半夏組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟2中半夏種子滅菌前進(jìn)行預(yù)處理，具體為：收集成熟的荊半夏種子，去除外果皮，35℃水浴3-4天。

4.如權(quán)利要求1所述的荊半夏組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟2中催芽的具體步驟為：在超凈工作臺(tái)上，取無菌培養(yǎng)皿，培養(yǎng)皿為兩層無菌濾紙，用無菌水潤濕，把消毒后的種子置于培養(yǎng)皿上，種子消毒方式為0.1％高錳酸鉀消毒25min，然后75％乙醇消毒5min，最后0.1％升汞消毒10min，無菌水沖洗4-5次，每次3min左右，避光，25℃催芽。

5.如權(quán)利要求1所述的荊半夏組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟3中，待胚軸長度1～3cm時(shí)，把胚軸切成0.5cm～0.7cm小段，轉(zhuǎn)接在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中25℃培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)18天～22天。