[發(fā)明專(zhuān)利]一種H5亞型禽流感病毒的快速檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910025206.2
• 申請(qǐng)日: 2019-01-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109628643B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣文明;劉華雷
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京睿智保誠(chéng)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

1.一種用于H5亞型禽流感病毒檢測(cè)的引物組和探針，其特征在于，所述的引物組和探針的序列信息如下：

其中上游引物的序列為SEQ?ID?NO.1，

下游引物的序列為SEQ?ID?NO.2；

探針的序列為SEQ?ID?NO.3。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物組和探針，其特征在于，所述探針的5'端標(biāo)記FAM，3'端標(biāo)記BHQ1。

3.權(quán)利要求1或2所述的引物組和探針在制備使用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)H5亞型禽流感病毒的試劑盒中的應(yīng)用。

4.一種檢測(cè)H5亞型禽流感病毒的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含權(quán)利要求1或2所述的引物組和探針。

5.一種非疾病診斷治療目的的檢測(cè)H5亞型禽流感病毒的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：

1)配置反應(yīng)體系：

在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)管中依次加入含dNTPs、Mg²⁺的2×qRT-PCR反應(yīng)緩沖液25μL、水7.0μL、濃度為10μmol/L的上游引物2.0μL、濃度為10μmol/L的下游引物2.0μL、濃度為10μmol/L的探針1.5μL、酶混合物2.5μL、需要檢測(cè)的病毒核酸樣品10.0μL；所述的上游引物、下游引物和探針為權(quán)利要求1或2所述的引物組和探針；

2)反應(yīng)步驟：

將步驟1)配置好的反應(yīng)體系密閉后，置于熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)；反應(yīng)條件：第一階段，反轉(zhuǎn)錄50℃/10min；第二階段，預(yù)變性95℃/2min；第三階段，95℃/10s，60℃/30s，40個(gè)循環(huán)；在第三階段每次循環(huán)的退火延伸時(shí)收集熒光；

3)結(jié)果檢測(cè)：

如果出現(xiàn)S型熒光曲線(xiàn)且Ct值≤38，則判斷為陽(yáng)性，否則判斷為陰性。