[發(fā)明專(zhuān)利]一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910022664.0
• 申請(qǐng)日: 2019-01-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109503373B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉玉峰;孫珊珊;朱麗君;梁元昊;胡瑞雪;徐文麗;馬海燕;李魯盼
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 遼寧大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07C67/48
• 分類(lèi)號(hào): C07C67/48;C07C67/56;C07C69/732;C07H17/07;C07H1/08
• 代理公司: 沈陽(yáng)杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

本發(fā)明公開(kāi)了一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法。包括以下步驟：將花楸果搗碎，加入乙醇溶液超聲提取，減壓濃縮得花楸果粗取物；采用聚酰胺色譜柱，以乙醇為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，減壓濃縮得不同梯度餾分洗脫物；再使用高速逆流色譜對(duì)不同餾分洗脫物進(jìn)行分離純化，即分別得純度高于95％的新綠原酸、綠原酸、槲皮素?3?O?(6″?α?L?鼠李糖基?4″′?α?L?鼠李糖基)?β?D?葡萄糖苷、3,5?O?雙咖啡酰基奎寧酸和蘆丁。本方法工藝簡(jiǎn)單，分離速度快，產(chǎn)品純度高，綜合成本低，具有很好的推廣使用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化合物的分離提純技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法。

背景技術(shù)

百華花楸(Sorbus pohuashanensis Hedl.)為薔薇科花楸屬植物，其果實(shí)稱(chēng)為“花楸果”，廣泛分布于我國(guó)東北和華北等地。果實(shí)可以食用，民間常以果實(shí)入藥，其果味苦甘、性平，具有抗炎、鎮(zhèn)咳、平喘、強(qiáng)心、抗氧化、抗癌和抗輻射等藥效，是保健品、食品、藥品、化妝品等重要的工業(yè)原料。現(xiàn)在研究表明花楸中含有豐富的多酚化合物，是其主要的活性物質(zhì)。其中黃酮的含量占常見(jiàn)漿果之首，且其抗氧化活性(ABTS指標(biāo)和DPPH指標(biāo))也都位居前列。其余的多酚成分，在清除自由基和抗氧化方面有較好的活性，同時(shí)對(duì)花楸酚類(lèi)提取物穩(wěn)定性考察時(shí)發(fā)現(xiàn)其酚類(lèi)成分可有效的代替合成抗氧化劑。

百華花楸作為一種珍貴的漿果，在黑龍江省資源豐富，具有巨大的潛在研究?jī)r(jià)值，但研究和開(kāi)發(fā)力度仍然不夠。此外，對(duì)百華花楸中酚類(lèi)和黃酮類(lèi)成分的分離制備更是鮮有報(bào)道。為了更好進(jìn)行花楸的藥效研究，同時(shí)解決目前市場(chǎng)上純品化合物資源缺乏的現(xiàn)狀，以便盡早實(shí)現(xiàn)花楸果在保健品、食品、藥品、化妝品等工業(yè)的應(yīng)用，因此，花楸果活性成分的分離是必要的。

目前，國(guó)內(nèi)外多采用柱色譜法、重結(jié)晶、制備液相的方法對(duì)化合物進(jìn)行分離提純。然而傳統(tǒng)的柱色譜法和重結(jié)晶等方法，操作繁瑣，耗時(shí)費(fèi)力，重現(xiàn)性差，且樣品損失量大。制備色譜雖然樣品分離純度較高，但成本高，分離樣品量少。高速逆流色譜(High-speedcounter-current chromatography HSCCC)是一種較新的液液分配色譜技術(shù)，它不用任何固體支撐體或載體，克服了傳統(tǒng)分離方法對(duì)樣品的不可逆性吸附作用，因而樣品回收率高，同時(shí)還具有儀器操作簡(jiǎn)單、應(yīng)用范圍廣、分離量大等優(yōu)點(diǎn)。此外，高速逆流色譜技術(shù)由于其分離機(jī)理不同于傳統(tǒng)的高效液相色譜技術(shù)，常作為HPLC的一種強(qiáng)有力的補(bǔ)充技術(shù)而廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離及純化。但目前國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)有將高速逆流色譜應(yīng)用于百華花楸果中多酚化合物的分離純化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足而提供一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法，可以從花楸果中同時(shí)分離出三種酚類(lèi)化合物和兩種黃酮類(lèi)化合物。該方法具有工藝簡(jiǎn)單、操作方便、樣品純度高、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法，包括如下步驟：

1)制備提取物：由花楸果制備粗提液，減壓濃縮，冷凍干燥，得花楸果粗提物；具體為：

1.1)將花楸果搗碎，按料液比1kg:5L～1kg:10L加入質(zhì)量濃度為60％～90％的乙醇或甲醇水溶液超聲提取，提取溫度為35～45℃，提取時(shí)間為30～60min，適時(shí)攪拌，過(guò)濾，得濾液；

進(jìn)一步的，將花楸果搗碎，按料液比1kg:10L，加入質(zhì)量濃度為80％的乙醇水溶液超聲提取，提取溫度為45℃，提取時(shí)間為1h。

更進(jìn)一步的，所述的花楸果來(lái)源于百華花楸。

1.2)將所得濾液，45℃下減壓濃縮，冷凍干燥，得花楸果粗提物。

2)初步純化：利用聚酰胺色譜柱對(duì)步驟1)得到的花楸果粗提物，以乙醇為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，得到不同梯度的洗脫物；具體為：