[發(fā)明專利]一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910022664.0
• 申請日: 2019-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN109503373B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉玉峰;孫珊珊;朱麗君;梁元昊;胡瑞雪;徐文麗;馬海燕;李魯盼
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C67/48
• 分類號(hào): C07C67/48;C07C67/56;C07C69/732;C07H17/07;C07H1/08
• 代理公司: 沈陽杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

1.一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）制備提取物：由花楸果制備粗提液，減壓濃縮，冷凍干燥，得花楸果粗提物；具體包括如下步驟：

1.1）將花楸果搗碎，按料液比1 kg : 5 L～1 kg : 10 L，加入質(zhì)量濃度為60%～90%的乙醇或甲醇水溶液超聲提取，提取溫度為35～45℃，提取時(shí)間為30～60 min，適時(shí)攪拌，過濾，得濾液；

1.2）將所得濾液，45℃下減壓濃縮，冷凍干燥，得花楸果粗提物；

2）初步純化：利用聚酰胺色譜柱對步驟1）得到的花楸果粗提物，以乙醇為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，得到不同梯度的洗脫物；具體包括如下步驟：

2.1）將步驟1）所得花楸果粗提物溶于水中，以上樣濃度15～25 mg/mL加入到聚酰胺色譜柱中，靜止2～3 h，先用蒸餾水洗脫，棄去洗脫液，然后依次使用質(zhì)量濃度為40～50％乙醇和質(zhì)量濃度為60～70％乙醇以3 mL/min的流速進(jìn)行洗脫，分別收集40～50％乙醇洗脫液和60～70％乙醇洗脫液；

2.2）分別對40～50％乙醇洗脫液和60～70％乙醇洗脫液進(jìn)行減壓濃縮、冷凍干燥，由40～50％乙醇洗脫液得A組分樣品，由60～70％乙醇洗脫液得B組分樣品；

3）分離化合物：利用高速逆流色譜對步驟2）得到的不同梯度的洗脫物進(jìn)行分離純化，得到多酚化合物，具體包括如下步驟：

3.1）將乙酸乙酯、正丁醇和水，按體積比2～4 : 0.5～2 : 4～6配成混合溶液，在分液漏斗中充分振搖后靜止分層，取上層作為固定相，下層作為流動(dòng)相；設(shè)置高速逆流色譜儀恒溫器溫度25℃，然后泵入固定相，待固定相充滿高速逆流色譜柱后，調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速為800～900 r/min，泵入流動(dòng)相，檢測波長為280 nm，流動(dòng)相流速為1.5～3 mL/min；取A組分樣品，按體積比1:0.5～2的固定相和流動(dòng)相，混合均勻，配成濃度為5～20 mg/mL的樣品溶液，進(jìn)樣，觀察色譜峰，待目標(biāo)峰出現(xiàn)時(shí)收集餾分，減壓濃縮去除有機(jī)溶劑，冷凍干燥得新綠原酸、綠原酸、槲皮素-3-O-(6″-α-L-鼠李糖基-4'''-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷和蘆丁；

3.2）將正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水，按體積比0.5～1 : 2～4 : 0.5～1 : 2～4配成混合溶液，在分液漏斗中充分振搖后靜止分層，取上層作為固定相，下層作為流動(dòng)相；設(shè)置高速逆流色譜儀恒溫器溫度25℃，然后泵入固定相，待固定相充滿高速逆流色譜柱后，調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速為800～900 r/min，泵入流動(dòng)相，檢測波長為330 nm，流動(dòng)相流速為1.5～3 mL/min；取B組分樣品溶解于流動(dòng)相中，配成濃度為5～15 mg/mL的樣品溶液，進(jìn)樣，觀察色譜峰，待目標(biāo)峰出現(xiàn)時(shí)收集餾分，旋轉(zhuǎn)濃縮去除有機(jī)溶劑，冷凍干燥得3,5-O-雙咖啡酰基奎寧酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，步驟3.1）中，按體積比：乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1.5:5，乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1:5或乙酸乙酯:正丁醇:水=3:1:5。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，步驟3.2）中，按體積比：正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:3.5，正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3.5:1:3.5或正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:4。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的一種快速分離純化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，所述的花楸果來源于百華花楸。