[發(fā)明專利]一種基于海膽狀空心銀鉑鈀三金屬納米粒子的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910021988.2 | 申請日： | 2019-01-10 |
| 公開（公告）號： | CN109406602B | 公開（公告）日： | 2020-08-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉青;董慧;劉會;顏芹;譚召靈;董云會 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東理工大學(xué) |
| 主分類號： | G01N27/327 | 分類號： | G01N27/327;G01N33/68;G01N33/574 |
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| 地址： | 255086 山東省淄*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 海膽 空心 銀鉑鈀三 金屬 納米 粒子 免疫 傳感器 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種基于海膽狀空心銀鉑鈀三金屬納米粒子的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：
（1）一種基于海膽狀空心銀鉑鈀三金屬納米粒子的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下幾個步驟：
將直徑為3.0 ~ 5.0 mm的玻碳電極用氧化鋁拋光粉拋光成鏡面，在無水乙醇中超聲清洗干凈；
取6.0 μL、0.5 ~ 4.0 mg/mL的多壁碳納米管/殼聚糖分散液滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
繼續(xù)將6.0 μL、5.0 ~ 15.0 μg/mL的癌胚抗原捕獲抗體滴加到電極表面，4 ℃冰箱中干燥；
繼續(xù)將3.0 μL、1.0 ~ 2.0 wt%的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點，pH = 6.98磷酸鹽緩沖液沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；
滴加6.0 μL、0.000001 ~ 1 ng/mL的一系列不同濃度的癌胚抗原溶液，pH = 6.98磷酸鹽緩沖液沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；
將6.0 μL、3.0 ~ 8.0 mg/mL的空心銀鉑鈀三金屬納米粒子標記的癌胚抗原檢測抗體分散液滴涂于電極表面，靜置于4 ℃冰箱中30 ~ 40 min，用pH = 6.98的磷酸鹽緩沖液沖洗，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一種檢測癌胚抗原的電流型免疫傳感器的工作電極；
所述多壁碳納米管/殼聚糖分散液的制備，步驟如下：
制備羧基化多壁碳納米管分散液
將0.5 g多壁碳納米管置于500 mL錐形瓶中，加入200 mL體積比為3:1的濃硫酸和濃硝酸混合酸，隨后在60 ℃超聲反應(yīng)2 h形成均勻的黑色溶液，6000 rpm高速離心5 min洗滌溶液至中性，然后將產(chǎn)物置于100 ℃真空烘箱中干燥8 h，得到羧基化碳納米管分散液；
制備殼聚糖納米粒子
在室溫下，取75 mg殼聚糖粉末溶于2%的乙酸，磁力攪拌器攪拌10 min，以5 mL/min的速率加入到20%的硫酸鈉溶液中，超聲震蕩1 h，3000 r/min離心四次，用超純水洗滌后得到殼聚糖納米粒子；
制備多壁碳納米管/殼聚糖分散液
取30 ~ 50.0 mg羧基化碳納米管溶解于50 mL去離子水中，將50.0 mg殼聚糖納米粒子溶解于50 mL、1%乙酸溶液中，超聲處理30 min后加入到羧基化碳納米管溶液中，磁力攪拌4h，然后，多壁碳納米管/殼聚糖用超純水離心分離，用1%的乙酸溶液洗去未反應(yīng)的殼聚糖，得到多壁碳納米管/殼聚糖分散液用鋁箔包裹避光保存，并儲存在4 ℃的冰箱中；
所述海膽狀空心銀鉑鈀三金屬納米粒子標記的癌胚抗原檢測抗體分散液的制備，步驟如下：
制備銀納米立方體分散液
將10 mL的乙二醇加入50 mL燒杯中，在140 ℃磁力攪拌下加熱1 h，接著將2.1 mL、3.016 mM鹽酸溶液快速注入乙二醇中持續(xù)加熱10 min，然后，將6 mL、94 mM硝酸銀溶液和6mL、147 mM聚乙烯吡咯烷酮混合以0.6 mL/min的速率加入到反應(yīng)混合物中，在140 ℃的溫度下持續(xù)加熱攪拌36 h，用超純水離心洗滌除去過量的聚乙烯吡咯烷酮，所得到的沉淀重新分散于20 mL超純水，得到銀納米立方體分散液用鋁箔包裹并儲存在4 ℃的冰箱中；
制備海膽狀空心銀鉑鈀三金屬納米分散液
首先將0.5 mL、10 mM鹽酸溶液與0.25 mL、5 mM四氯鈀酸鉀，0.25 mL、5 mM氯鉑酸混合2 h，接著向制備好的銀納米立方體分散液中加入0.5 mL、100 mM聚乙烯吡咯烷酮，將混合液置于油浴鍋中加熱5 min，再以2 mL/min的速率注入含有鹽酸、四氯鈀酸鉀和氯鉑酸的溶液中，所得溶液反應(yīng)1 h，用飽和的氯化鈉以及10 mL、50 mM硝酸鐵溶液離心洗滌，收集黑色沉淀物，將其分散在1.0 mL超純水中進一步使用；
制備海膽狀空心銀鉑鈀三金屬納米粒子標記的癌胚抗原檢測抗體分散液
取3.0 ~ 8.0 mL海膽狀空心銀鉑鈀納米分散液分散到1.0 mL、pH = 6.98的磷酸鹽緩沖液中，加入1.0 ~ 2.0 mL、10.0 ~ 20.0 μg/mL的癌胚抗原檢測抗體分散液，置于4 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化8 ~ 12 h后，在1500 rpm轉(zhuǎn)速下離心0.5 ~ 2.0 min，得到下層沉淀，加入1.0 mL、pH = 6.98的磷酸鹽緩沖溶液離心洗滌1次，將下層沉淀重新分散于1.0mL、pH = 6.98的磷酸鹽緩沖溶液中，得到海膽狀空心銀鉑鈀納米粒子標記的癌胚抗原檢測抗體分散液，置于4 ℃下保存；
（2）一種基于海膽狀空心銀鉑鈀三金屬納米粒子的免疫傳感器，用于癌胚抗原的檢測，檢測步驟如下：
使用電化學(xué)工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL的pH值為6.98的磷酸鹽緩沖溶液中進行測試；
用時間-電流法對分析物進行檢測，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔0.1 s，運行時間400 s；
當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50 s向的磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。
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