[發明專利]一種基于生物素量子點探針的C反應蛋白超敏檢測方法

有效

• 申請號: 201910020134.2
• 申請日: 2019-01-09
• 公開（公告）號: CN109633174B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 劉丹;馬碧書;劉佳;姜雨薇;李貞;張云嬌;羅佳;徐天凱;張明
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學海源學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 昆明金科智誠知識產權代理事務所(普通合伙) 53216
• 代理人: 胡亞蘭

一種基于生物素量子點探針的C反應蛋白超敏檢測。1、分別在盛有包被好抗?CRP固相單抗的膜芯片基底的西林瓶中，各自加入2mL含有不同濃度的CRP溶液，37℃孵育1h后用濃度為0.01mol/L，pH＝7.4的PBS沖洗三遍；2、分別加入2mL含有0.01mg/mL鏈霉親和素和抗CRP單抗耦合的QDs探針受體蛋白的PBS溶液，37℃孵育30min后用濃度為0.01mol/L，pH＝7.4的PBS沖洗三遍；3、加入2mL 1:2000倍稀釋的生物素化熒光QDs，37℃下孵育20min后用濃度為0.01mol/L，pH＝7.4的PBS沖洗三遍，氮氣快速吹干纖維素膜基底后用紫外，可見光分光光度計測量熒光強度。

技術領域

本發明屬于C反應蛋白檢測技術領域，具體涉及一種基于生物素量子點探針的C反應蛋白超敏膜蛋白芯片檢測方法。

背景技術

熒光量子點(Quantum Dots，以下簡稱QDs)為粒徑小于或接近激子波爾半徑的半導體納米晶體顆粒。其激發光譜寬且連續分布，發射光譜窄而對稱、熒光穩定性強，不易發生光漂白且可實現對發射光譜的控制，因此較傳統各類熒光試劑具有顯著的優勢。本發明以生物素修飾的QDs作為熒光探針，利用兩組識別C反應蛋白不同抗原表位的單克隆抗體，分別制備出與鏈霉親和素耦合的蛋白作為熒光探針熒光信號放大受體；以及表面通過抗體修飾的纖維素濾膜做為芯片基底。建立起一種用于C反應蛋白體外檢測的超敏熒光膜芯片檢測系統。

本發明不僅可用于C反應蛋白的超敏體外檢測，該發明體系也可適用于構建各種腫瘤標志物和激素如癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)、前列腺特異性抗原(prostate specific antigen,PSA)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黃體化激素(luteinizinghormone,LH)、人絨毛促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)等的檢測；以及各種病原體特異性蛋白抗原如乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、鼠疫耶爾森桿菌F1抗原、葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)、鏈球菌異嗜抗原M蛋白等的檢測，在這里為了能直觀明了地闡述該發明，特以本發明覆蓋的諸多檢測類型之一：C反應蛋白(CRP)為例加以說明。

C-反應蛋白(C-reactive protein,CRP)是在機體受感染或組織受損時產生的一種急性蛋白，因為可以結合肺炎球菌細胞壁C-多糖故而得名。CRP可激活補體并介導吞噬細胞的調理作用，清除入侵機體的病原微生物和損傷，壞死，凋亡的組織細胞。在機體的天然免疫過程中發揮重要的保護作用。CRP作為一種非特異的炎癥標志物，可用于判斷組織炎癥或損傷程度，對臨床疾病鑒別診斷及治療觀察上均有重要意義。而近十年的研究揭示了CRP直接參與了炎癥與動脈粥樣硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病最強有力的預示因子與危險因子。目前臨床上常通過非免疫標記法如膠乳凝集法、免疫比濁法、單項免疫擴散等，以及酶聯免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、膠體金法、放射免疫法、化學發光等各類免疫標記技術對CRP進行檢測。非標記類免疫檢測法雖操作相對簡便，但結果有靈敏度低，準確性差，耗時長等缺點。而標記類免疫檢測技術雖然提高了靈敏度，卻需要特殊的儀器設備，對操作人員乃至工作環境有一定要求，成本高，流程復雜，耗時長，試劑昂貴且有危險性。

發明內容

本發明能解決的技術問題

為了解決上述問題，本發明提供了一種基于生物素量子點探針的C反應蛋白超敏檢測方法。

本發明的具體技術方案為：一種基于生物素量子點探針的C反應蛋白超敏檢測方法，包括以下步驟：