[發(fā)明專(zhuān)利]一種卡馬西平人工抗原的合成方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910019175.X
• 申請(qǐng)日: 2019-01-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109678947A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胥傳來(lái);周升陽(yáng);匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強(qiáng);宋珊珊;胡擁明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/765
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/765;C07K1/107;C07D223/22
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;張仕婷

一種卡馬西平人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以亞氨基芪甲酰氯與4?氨基丁酸甲酯鹽酸鹽反應(yīng)得到具有羧基的產(chǎn)物為半抗原，用碳二亞胺法將半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，用紫外法測(cè)定偶聯(lián)物的偶聯(lián)比。本發(fā)明成功合成了卡馬西平人工抗原，合成步驟簡(jiǎn)潔，有效，完全可用于免疫分析中，為以后人們的研究提供了必需的人工抗原。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種卡馬西平人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

卡馬西平作為《世界衛(wèi)生組織基本藥物標(biāo)準(zhǔn)清單》和《中國(guó)國(guó)家基本藥物目錄》在列藥物，屬于廣譜抗驚厥藥的一種，主要用于治療癲癇和三叉神經(jīng)痛等精神疾病。同時(shí)具有治療心律失常和抗利尿的作用，但隨著該類(lèi)藥物的廣泛使用，其毒副作用也日益受到重視。較常見(jiàn)的不良反應(yīng)有視力模糊或復(fù)視、驚厥，劇烈眩暈或嗜睡，誘發(fā)的刺激抗利尿激素釋放，可引起水鈉潴留。水鈉潴留可造成組織水腫，體重異常增加。這為不法分子向動(dòng)物體內(nèi)非法注水，并通過(guò)藥物保水抗利尿功能，以達(dá)到增重增收的目的提供了可能。同時(shí)新版獸藥典并未收錄卡馬西平及其代謝物，因此檢測(cè)動(dòng)物組織中卡馬西平及其代謝物異常含量，對(duì)打擊非法藥物添加和注水具有重要意義。

酶聯(lián)免疫法（ELISA）是一種極為高效、敏感、快速的檢測(cè)方法，然而得到高親和力和高特異性的單克隆抗體是免疫學(xué)檢測(cè)的前提，人工抗原的合成是其中重要的一步。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種卡馬西平人工抗原的合成方法，所制備的產(chǎn)品用于卡馬西平免疫分析方法研究，為今后人們的研究提供了必需的人工抗原。

本發(fā)明的技術(shù)方案，一種卡馬西平人工抗原的合成方法，由亞氨基芪甲酰氯與4-氨基丁酸甲酯鹽酸鹽反應(yīng)得到具有羧基的產(chǎn)物，即半抗原CBZ，用碳二亞胺法將半抗原CBZ與載體蛋白偶聯(lián)，即得到卡馬西平人工抗原。

具體步驟如下：

（1）半抗原CBZ的合成：

合成路線如下：

將化合物1 22.20mmol溶于四氫呋喃（THF）50.0mL溶液，加入4-氨基丁酸甲酯鹽酸鹽22.20mol和三乙胺（TEA）66.83mmol，將反應(yīng)在室溫下攪拌并回流過(guò)夜；用乙酸乙酯萃取混合物，得到化合物2；

將化合物2 5.95mmol溶于THF / H₂O 10.0mL溶液中，加入LiOH 15.0mmol，在室溫下反應(yīng)過(guò)夜；將混合物用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH至3，過(guò)濾并濃縮，得到目標(biāo)化合物半抗原CBZ；

（2）完全抗原的制備：將步驟（1）制備所得半抗原CBZ與BSA偶聯(lián)得到偶聯(lián)物完全抗原CBZ-BSA；或與KLH偶聯(lián)得到偶聯(lián)物完全抗原CBZ-KLH；CBZ-BSA和CBZ-KLH即為卡馬西平人工抗原。

所述完全抗原CBZ-BSA制備方法如下：

a、稱(chēng)取8.9 mg CBZ，1-乙基碳二亞胺鹽酸鹽16.23 mg，N-羥基琥珀酰亞胺8.8mg，用600μL無(wú)水N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到A液，室溫?cái)嚢璺?-6h；稱(chēng)取牛血清蛋白BSA 10 mg，加入等體積硼酸緩沖溶液，得到B液；

在室溫條件下逐滴將A液加入到B液中，室溫反應(yīng)過(guò)夜，即得偶聯(lián)物CBZ-BSA混合液；

b、透析：取8cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去離子水沖洗3min，保存在4℃去離子水中備用；將步驟a所得偶聯(lián)物CBZ-BSA混合液放入透析袋于0.01mol/L的PBS中透析3天，每天三次換液，即得完全抗原CBZ-BSA。

步驟a所述CBZ與BSA摩爾比為30:1。

卡馬西平人工抗原的鑒定

（1）采用核磁共振和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定半抗原。